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Nature Methodsのメルクのアプリケーションノートをお読みください！
http://www.nature.com/app_notes/nmeth/2012/121007/pdf/an8620.pdf
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メルクのLentiBriteレンチウイルスバイオセンサーの利点の詳細はこちらをクリックしてください
バイオセンサーは、特定のタンパク質の有無や、細胞の生存状態におけるそのタンパク質の細胞内での位置を検出するために使用できます。蛍光顕微鏡法またはタイムラプスビデオ撮影によって細胞内の目的タンパク質を可視化する手段としては、多くの場合、蛍光タグが必要です。破壊せずに生きている細胞を可視化することで、研究者は細胞の状態をリアルタイムで観察することができます。
レンチウイルスベクター系は、遺伝子産物を細胞に導入するために使用される一般的な研究ツールです。レンチウイルストランスフェクションには、分裂細胞および非分裂細胞のトランスフェクション効率が高いこと、導入遺伝子の長期安定発現、および低い免疫原性といった、ウイルス以外の方法（化学物質に基づくトランスフェクションなど）を上回る利点があります。
EMD Milliporeは、LentiBriteレンチウイルスバイオセンサーをご紹介しています。これは、生細胞およびin vitro解析においてさまざまな細胞／疾患状態下で可視化を行うための、オートファジー、アポトーシス、および細胞構造に関連する重要で基本的なタンパク質をコードするパッケージ済みのレンチウイルス粒子製品群です。
EMD MilliporeのLentiBrite PSD-95-RFPレンチウイルス粒子では、明るい蛍光と正確な位置決定が得られ、神経細胞のPSDダイナミクスの生細胞解析が行えます。
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バイオセンサーは、特定のタンパク質の有無や、細胞の生存状態におけるそのタンパク質の細胞内での位置を検出するために使用できます。蛍光顕微鏡法またはタイムラプスビデオ撮影によって細胞内の目的タンパク質を可視化する手段としては、多くの場合、蛍光タグが必要です。破壊せずに生きている細胞を可視化することで、研究者は細胞の状態をリアルタイムで観察することができます。
レンチウイルスベクター系は、遺伝子産物を細胞に導入するために使用される一般的な研究ツールです。レンチウイルストランスフェクションには、分裂細胞および非分裂細胞のトランスフェクション効率が高いこと、導入遺伝子の長期安定発現、および低い免疫原性といった、ウイルス以外の方法（化学物質に基づくトランスフェクションなど）を上回る利点があります。
EMD Milliporeは、LentiBriteレンチウイルスバイオセンサーをご紹介しています。これは、生細胞およびin vitro解析においてさまざまな細胞／疾患状態下で可視化を行うための、オートファジー、アポトーシス、および細胞構造に関連する重要で基本的なタンパク質をコードするパッケージ済みのレンチウイルス粒子製品群です。
- パッケージ済み、GFP、RFPを用いた蛍光タグ付き
- 従来の化学ベースのトランスフェクション法やその他のウイルス以外のトランスフェクション法と比較してトランスフェクション効率が高い
- 分裂細胞、非分裂細胞、および初代細胞または幹細胞などのトランスフェクションが困難な細胞にもトランスフェクト可能
- 細胞機能を破壊しない
EMD MilliporeのLentiBrite PSD-95-RFPレンチウイルス粒子では、明るい蛍光と正確な位置決定が得られ、神経細胞のPSDダイナミクスの生細胞解析が行えます。
興奮性シナプスのシナプス後側には、電子密度とタンパク質密度の高い領域であるシナプス後膜肥厚（PSD）があり、PSDは神経伝達物質をシナプス前神経伝達物質放出部位に隣接させ、シグナル伝達分子を濃縮します。 MAGUK（膜結合型グアニル酸キナーゼ）は、PSDの中心的なオーガナイザーとして、そしてシグナル伝達分子として機能します。 このようなMAGUKの1つであるPSD-95は、成熟シナプスの樹状突起棘に結合しており、他のMAGUKと比較して相対的に動きません。 蛍光タンパク質と融合させたPSD-95は、PSD-95の代謝回転と移動度の定量に利用されています。
EMD MilliporeのLentiBrite PSD-95-RFPレンチウイルス粒子では、明るい蛍光と正確な位置決定が得られ、神経細胞のPSDダイナミクスの生細胞解析が行えます。
EMD MilliporeのLentiBrite PSD-95-RFPレンチウイルス粒子では、明るい蛍光と正確な位置決定が得られ、神経細胞のPSDダイナミクスの生細胞解析が行えます。
アプリケーション
蛍光顕微鏡イメージング：
初代ラット海馬ニューロン細胞を、ポリ-D-リジンでコーティングしたチャンバー付きカバーガラスに5日間プレーティングし、MOI＝20で24時間レンチウイルス粒子を形質導入しました。 培地交換後、さらに2週間培養して、油浸広視野蛍光顕微鏡により細胞を生きた状態でイメージングしました。 PSD95-RFPは神経炎に沿って点線状の分布を示します。
最適な蛍光の可視化のため、最適な生細胞解析のために、トランスフェクション／感染後24～48時間以内に標的発現レベルを解析することをお勧めします。これは、特にトランスフェクトが困難な細胞株では蛍光強度が経時的に低下する可能性があるためです。感染細胞は、トランスフェクション／感染が成功した後に凍結させ、培養時に解凍して、24～48時間を超えて陽性蛍光発現を維持することができます。 蛍光発現の長さと強さは細胞株によって異なります。トランスフェクトが困難な細胞株では高いMOIが必要な場合があります。
初代ラット海馬ニューロン細胞を、ポリ-D-リジンでコーティングしたチャンバー付きカバーガラスに5日間プレーティングし、MOI＝20で24時間レンチウイルス粒子を形質導入しました。 培地交換後、さらに2週間培養して、油浸広視野蛍光顕微鏡により細胞を生きた状態でイメージングしました。 PSD95-RFPは神経炎に沿って点線状の分布を示します。
最適な蛍光の可視化のため、最適な生細胞解析のために、トランスフェクション／感染後24～48時間以内に標的発現レベルを解析することをお勧めします。これは、特にトランスフェクトが困難な細胞株では蛍光強度が経時的に低下する可能性があるためです。感染細胞は、トランスフェクション／感染が成功した後に凍結させ、培養時に解凍して、24～48時間を超えて陽性蛍光発現を維持することができます。 蛍光発現の長さと強さは細胞株によって異なります。トランスフェクトが困難な細胞株では高いMOIが必要な場合があります。
研究カテゴリー
ニューロサイエンス
ニューロサイエンス
研究サブカテゴリー
シナプス・シナプス生物学
シナプス・シナプス生物学
構成
TagPSD95-RFPレンチウイルス：
25 µLの最低3 x 10E8感染単位（IFU）/mLのレンチウイルス粒子1バイアル。 ロットに固有の力価情報については、データシートの“ウイルス力価”をご覧ください。
プロモーター
EF-1（伸長因子-1）
感染多重度（MOI）
MOI = 感染させた細胞数に対する感染性レンチウイルス粒子数（IFU）の比
高い形質導入効率およびシグナル強度を達成するためのニューロンに対する典型的なMOI値は、20～40の範囲です。 この目標に対して、一部の神経細胞タイプはより高いまたはより低いMOを必要とする場合があります
注：望ましい形質導入効率およびシグナル強度を達成するために、各細胞型およびレンチウイルス標的について、お客様がMOIを調整し最適化してください。
25 µLの最低3 x 10E8感染単位（IFU）/mLのレンチウイルス粒子1バイアル。 ロットに固有の力価情報については、データシートの“ウイルス力価”をご覧ください。
プロモーター
EF-1（伸長因子-1）
感染多重度（MOI）
MOI = 感染させた細胞数に対する感染性レンチウイルス粒子数（IFU）の比
高い形質導入効率およびシグナル強度を達成するためのニューロンに対する典型的なMOI値は、20～40の範囲です。 この目標に対して、一部の神経細胞タイプはより高いまたはより低いMOを必要とする場合があります
注：望ましい形質導入効率およびシグナル強度を達成するために、各細胞型およびレンチウイルス標的について、お客様がMOIを調整し最適化してください。
品質
HT-1080細胞の形質導入により評価されており、 形質導入効率の評価のため蛍光イメージングを行っています。
物理的形状
PEG沈殿
保管および安定性
保存と取り扱い
レンチウイルスは、-80°Cで保存すると受領日から少なくとも4か月安定です。 最初に解凍した後は、直ちに氷上に置き、ワーキングアリコートとして-80°Cで凍結してください。 凍結アリコートは少なくとも2か月保存できます。 さらに凍結／融解を行うとウイルス力価および形質導入効率が低下する場合があります。
安全性に関する重要な注意
本品で提供される第3世代ベクターなどの複製能欠損レンチウイルスベクターは、 ヒトや動物で疾患を引き起こすことは知られていません。 しかし、レンチウイルスは宿主細胞のゲノムに組み込まれる可能性があるため、幾分、挿入変異誘発のリスクがあります。 物質はリスクグループ2であるため、BSL2の管理下で取り扱ってください。 レンチウイルスベクターのバイオセーフティに関する詳細な考察は、以下に示されています。Pauwels, K. et al. (2009). State-of-the-art lentiviral vectors for research use: Risk assessment and biosafety recommendations. Curr. Gene Ther. 9: 459-474.
レンチウイルスは、-80°Cで保存すると受領日から少なくとも4か月安定です。 最初に解凍した後は、直ちに氷上に置き、ワーキングアリコートとして-80°Cで凍結してください。 凍結アリコートは少なくとも2か月保存できます。 さらに凍結／融解を行うとウイルス力価および形質導入効率が低下する場合があります。
安全性に関する重要な注意
本品で提供される第3世代ベクターなどの複製能欠損レンチウイルスベクターは、 ヒトや動物で疾患を引き起こすことは知られていません。 しかし、レンチウイルスは宿主細胞のゲノムに組み込まれる可能性があるため、幾分、挿入変異誘発のリスクがあります。 物質はリスクグループ2であるため、BSL2の管理下で取り扱ってください。 レンチウイルスベクターのバイオセーフティに関する詳細な考察は、以下に示されています。Pauwels, K. et al. (2009). State-of-the-art lentiviral vectors for research use: Risk assessment and biosafety recommendations. Curr. Gene Ther. 9: 459-474.
法的情報
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
保管分類コード
10 - Combustible liquids
WGK
WGK 2
適用法令
試験研究用途を考慮した関連法令を主に挙げております。化学物質以外については、一部の情報のみ提供しています。 製品を安全かつ合法的に使用することは、使用者の義務です。最新情報により修正される場合があります。WEBの反映には時間を要することがあるため、適宜SDSをご参照ください。
Jan Code
17-10226:
試験成績書（COA）
製品のロット番号・バッチ番号を入力して、試験成績書（COA） を検索できます。ロット番号・バッチ番号は、製品ラベルに「Lot」または「Batch」に続いて記載されています。
ライフサイエンス、有機合成、材料科学、クロマトグラフィー、分析など、あらゆる分野の研究に経験のあるメンバーがおります。.
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