T8003

Tripsina

Type I, ~10,000 BAEE units/mg protein

• Numero CAS: 9002-07-7
• Classificazione EC (Enzyme Commission): 3.4.21.4 (BRENDA, IUBMB)
• Numero CE: 232-650-8
• Numero MDL: MFCD00082094
• Codice UNSPSC: 12352204
• NACRES: NA.54

Proprietà

• Tipo: Type I
• Forma fisica: solid
• Attività specifica: ~10,000 BAEE units/mg protein
• PM: 23.8 kDa
• Composizione: protein, 90-100%
• Solubilità: hydrochloric acid: soluble 1 mM, clear
• Attività estranea: Chymotrypsin ≤4 BTEE units/mg protein
• Condizioni di spedizione: wet ice
• Temperatura di conservazione: −20°C

Descrizione

Applicazioni

Per la digestione di peptidi con la tripsina, utilizzare un rapporto compreso all′incirca tra 1:100 e 1:20 per tripsina:peptide. L′impiego tipico di questo prodotto consiste nella rimozione delle cellule aderenti da una superficie di coltura. La concentrazione di tripsina necessaria per staccare le cellule dal relativo substrato dipende principalmente dal tipo di cellule e dall′età della coltura. Le tripsine sono state adoperate anche per la ri-sospensione delle cellule durante la coltura cellulare, nella ricerca proteomica per la digestione delle proteine e in varie digestioni in gel. Ulteriori applicazioni comprendono la valutazione della cristallizzazione con tecniche basate su membrana e l′impiego in uno studio per stabilire se i tassi e la resa del folding proteico possono essere limitati dalla presenza di trappole cinetiche.

Azioni biochim/fisiol

La tripsina scinde i peptidi sul lato C-terminale dei residui di lisina e arginina. La velocità di idrolisi di questa reazione viene rallentata se su uno dei lati del sito di scissione è presente un residuo acido. L′idrolisi si arresta se sul lato carbossile del sito di scissione è presente un residuo di prolina. Il pH ottimale per l′attività della tripsina è 7-9. La tripsina può anche scindere i legami esterei e ammidici dei derivati sintetici degli amminoacidi. L′EDTA viene aggiunto alle soluzioni di tripsina come agente chelante che neutralizza gli ioni di calcio e magnesio che oscurano i legami peptidici su cui agisce la tripsina. La rimozione di questi ioni aumenta l′attività enzimatica.

Gli inibitori delle serin proteasi, tra cui ad esempio DFP, TLCK, APMSF, AEBSEF e aprotinina, inibiscono la tripsina.

Componenti

Trypsin consists of a single chain polypeptide of 223 amino acid residues, produced by the removal of the N-terminal hexapeptide from trypsinogen which is cleaved at the Lys - lle peptide bond. The sequence of amino acids is cross-linked by 6 disulfide bridges. This is the native form of trypsin, beta-trypsin. BETA-trypsin can be autolyzed, cleaving at the Lys - Ser residue, to produce alpha-trypsin. Trypsin is a member of the serine protease family.

Avvertenza

Solutions in 1 mM HCl are stable for 1 year in aliquots and stored at -20°C. The presence of Ca²⁺ will also diminish the self-autolysis of trypsin and maintain its stability in solution. Trypsin will also retain most of its activity in 2.0 M urea, 2.0 M guanidine HCl, or 0.1% (w/v) SDS.

Definizione di unità

Un′unità BAEE produce una A₂₅₃ di 0,001 al minuto a pH 7,6 a 25°C usando il BAEE come substrato.

Nota sulla preparazione

Soluble in 1 mM HCl at 1 mg/mL.

Informazioni sulla sicurezza

• Pittogrammi: GHS08,GHS07
• Avvertenze: Danger
• Indicazioni di pericolo: H315,H319,H334,H335
• Consigli di prudenza: P261 - P264 - P271 - P280 - P302 + P352 - P305 + P351 + P338
• Classi di pericolo: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• Organi bersaglio: Respiratory system
• Codice della classe di stoccaggio: 11 - Combustible Solids
• Classe di pericolosità dell'acqua (WGK): WGK 1
• Dispositivi di protezione individuale: dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves