T4799

Tripsina

lyophilized powder, BioReagent, suitable for cell culture, 1,000-2,000 BAEE units/mg solid

• Sinonimo/i: Cocoonase, Tryptar, Tryptase
• Numero CAS: 9002-07-7
• Classificazione EC (Enzyme Commission): 3.4.21.4 (BRENDA, IUBMB)
• Numero CE: 232-650-8
• Numero MDL: MFCD00082094
• Codice UNSPSC: 12352204
• NACRES: NA.75

Proprietà

• Origine biologica: Porcine pancreas
• Nome Commerciale: BioReagent
• Forma fisica: lyophilized powder
• Attività specifica: 1,000-2,000 BAEE units/mg solid
• PM: 23.8 kDa
• Concentrazione: 25 mg/mL
• tecniche: cell culture | mammalian: suitable; single cell analysis: suitable
• pH: 7.6
• Condizioni di spedizione: ambient
• Temperatura di conservazione: −20°C

Descrizione

Descrizione generale

La tripsina è adatta alla disaggregazione dei tessuti in virtù della sua azione efficace e della sua tolleranza verso diversi tipi di cellule e la neutralizzazione indotta dal siero.

Applicazioni

La tripsina di pancreas porcino è stata usata per digerire le ossa di pollo. Inoltre, è stata adoperata nell′isolamento delle cellule endoteliali luteiniche.

Per la digestione dei peptidi con tripsina, utilizzare un rapporto di circa 1:100-1:20 tra tripsina e peptide. L′uso tipico di questo prodotto è nella rimozione delle cellule aderenti dalla superficie di una coltura. La concentrazione di tripsina necessaria ad allontanare le cellule dal loro substrato dipende in primo luogo dal tipo cellulare e dall′età della coltura. Le tripsine sono state usate anche per risospendere le cellule durante la coltura, nella ricerca proteomica per la digestione delle proteine e in diverse digestioni tramite gel†. Ulteriori applicazioni includono la valutazione della cristallizzazione per mezzo di tecniche basate sulle membrane e in uno studio per accertare che la presenza di trappole cinetiche può limitare i tassi di ripiegamento e le rese delle proteine.

Azioni biochim/fisiol

La tripsina scinde i peptidi dall′estremità C-terminale dei residui della lisina e dell′arginina. Se su una o l′altra estremità del sito di scissione vi è un residuo acido, la velocità dell′idrolisi della reazione si riduce, mentre la presenza di un residuo di prolina sull′estremità carbossilica del sito di scissione interrompe l′idrolisi. Il pH ottimale per l′attività della tripsina è tra 7 e 9. La tripsina è anche in grado di scindere i legami esteri e ammidici dei derivati sintetici degli aminoacidi. Alle soluzioni di tripsina si aggiunge EDTA come agente chelante che neutralizza gli ioni calcio e magnesio che coprono i legami peptidici su cui agisce la tripsina. La rimozione di questi ioni aumenta l′attività enzimatica.

Gli inibitori delle serin proteasi, inclusi tra gli altri DFP, TLCK, APMSF, AEBSEF e aprotina inibiranno la tripsina

Componenti

La tripsina consiste in un polipeptide a singola catena composto da 223 residui di amminoacidi, prodotti dalla rimozione dell′esapeptide N-terminale dal tripsinogeno che viene scisso in corrispondenza del legame peptidico Lys - lle. La sequenza di amminoacidi è reticolata da 6 ponti disolfuro. Questa è la forma nativa della tripsina, la beta-tripsina. La BETA-tripsina può essere autolisata, tramite scissione in corrispondenza del residuo Lys - Ser, per produrre l′alfa-tripsina. La tripsina è un membro della famiglia delle serin proteasi.

Avvertenza

Le soluzioni in 1 mM di HCl sono stabili per un anno in aliquote conservate a -20 °C. La presenza di Ca²⁺ diminuisce anche l′auto-autolisi della tripsina e ne mantiene la stabilità in soluzione. La tripsina conserva inoltre la maggior parte della propria attività in 2,0 M di urea, 2,0 M di guanidina HCl o 0,1% (p/v) di SDS.

Definizione di unità

Una unità BAEE produrrà un ΔA₂₅₃ di 0,001 per minuto a pH 7,6 a 25 °C, usando BAEE come substrato. Una unità BTEE = 320 unità ATEE. Volume della reazione = 3,2 mL (1 cm via luminosa).

Nota sulla preparazione

Questo prodotto è una polvere liofilizzata solubile in soluzione salina bilanciata di Hank a 25 mg/mL.
Per le applicazioni che richiedono l′EDTA, la solubilizzazione della tripsina deve essere eseguita con una soluzione salina tamponata priva di Ca²⁺ e Mg²⁺.

Informazioni sulla sicurezza

• Pittogrammi: GHS08,GHS07
• Avvertenze: Danger
• Indicazioni di pericolo: H315,H319,H334,H335
• Consigli di prudenza: P261 - P264 - P271 - P280 - P302 + P352 - P305 + P351 + P338
• Classi di pericolo: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• Organi bersaglio: Respiratory system
• Codice della classe di stoccaggio: 11 - Combustible Solids
• Classe di pericolosità dell'acqua (WGK): WGK 1
• Dispositivi di protezione individuale: dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves