P8125
Perossidasi
Type I, essentially salt-free, lyophilized powder, ≥50 units/mg solid (using pyrogallol)
Sinonimo/i:
Donatore: idrogeno-perossido ossidoreduttasi, Perossidasi di rafano
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About This Item
Prodotti consigliati
Tipo
Type I
Livello qualitativo
Stato
essentially salt-free, lyophilized powder
Attività specifica
≥50 units/mg solid (using pyrogallol)
PM
~44 kDa
Solubilità
0.1 M phosphate buffer: soluble (pH 6.0)
H2O: soluble
Rapporto di assorbanza
RZ ≥1.0
Temperatura di conservazione
2-8°C
Stringa SMILE
[O+H2]O[O-]
InChI
1S/H2O3/c1-3-2/h1-2H
JSPLKZUTYZBBKA-UHFFFAOYSA-N
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Descrizione generale
La perossidasi di rafano si isola dalle radici del rafano (Amoracia rusticana) e appartiene al gruppo delle perossidasi con ferroprotoporfirina. L′HRP è un polipeptide a singola catena che contiene quattro ponti disolfuro. È una glicoproteina che contiene il 18% di carboidrati. La composizione dei carboidrati include galattosio, arabinosio, xilosio, fucosio, mannosio, mannosamina e galattosamina, a seconda del singolo isozima. Il peso molecolare (circa 44 kDa) include la catena polipeptidica (33.890 Dalton), la emina con Ca2+ (circa 700 Dalton) e il carboidrato (circa 9.400 Dalton). Esistono almeno sette isoenzimi di HRP. Il punto isoelettrico degli isoenzimi della perossidasi di rafano è compreso fra 3,0 e 9,0.
Applicazioni
Peroxidase from horseradish has been used:
- in fecal starch analysis
- to measure plasma glucose levels by Trinder method
- to incubate feruloylated arabinoxylan fractions and also to evaluate oxidative coupling
- in the detection of glycoproteins
Azioni biochim/fisiol
HRP readily combines with hydrogen peroxide (H2O2) and the resultant [HRP-H2O2] complex can oxidize a wide variety of hydrogen donors. The optimal pH is 6.0-6.5 and the enzyme is most stable in the pH range of 5.0-9.0. HRP can be conjugated to antibodies by several different methods including glutaraldehyde, periodate oxidation, through disulfide bonds, and also via amino and thiol directed cross-linkers. It is smaller and more stable than the enzyme labels β-galactosidase and alkaline phosphatase.Hence, it is the most desired label. Also, its glycosylation leads to lower non-specific binding. It is also used for the determination of glucose and peroxides in solution. Sodium azide, cyanide, L-cystine, dichromate, ethylenethiourea, hydroxylamine, sulfide, vanadate, p-aminobenzoic acid, and Cd2+, Co2+, Cu2+, Fe3+, Mn2+, Ni2+, Pb2+ ions are known to inhibit the enzyme activity.
When incubated with a substrate, horseradish peroxidase produces a coloured, fluorimetric, or luminescent derivative of the labeled molecule, allowing quantification.
Definizione di unità
Una unità di pirogallolo forma 1,0 mg di purpurogallina da pirogallolo in 20 secondi a pH 6,0 e 20 °C.
Risultati analitici
Il RZ (Reinheitszahl) è il rapporto di assorbanza A403/A275 determinato a 0,5-1,0 mg/mL in acqua deionizzata. Misura il contenuto di emina, non l′attività enzimatica. Anche preparazioni con un RZ elevato possono avere una bassa attività enzimatica.
Altre note
Per maggiori informazioni sulla perossidasi visitare la pagina www.sigma-aldrich.com/enzymeexplorer.
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Dispositivi di protezione individuale
Eyeshields, Gloves, type N95 (US)
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Protocolli
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To standardize a procedure for the assay of Peroxidase using 2,2'-Azino-bis(3-Ethylbenzthiazoline-6-Sulfonic Acid) as a substrate.
This procedure is for the determination of Peroxidase enzymatic activity using Pyrogallol as the substrate.
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