D4693

Dispase^® II

protease

• Sinônimo(s): Protease
• Número CAS: 42613-33-2
• Número CE: 255-914-4
• Número MDL: MFCD02253017
• Código UNSPSC: 12352204
• NACRES: NA.54

Propriedades

• Nível de qualidade: 100
• forma: lyophilized solid
• atividade específica: ≥0.5 units/mg solid
• técnica(s): cell culture | mammalian: suitable; single cell analysis: suitable
• solubilidade: 10 mM NaAc (pH 7.5) and 5 mM CaAc: soluble
• temperatura de armazenamento: 2-8°C

Descrição

Aplicação

A enzima da Sigma foi usada para desenvolver um protocolo de cultura ex vivo dos botões mamários embrionários de camundongo. Ela foi usada no tratamento de peças de coração de rato para o isolamento de mitocôndrias de coração murino. Ela também foi usada para isolar células-tronco derivadas de polpa dentária (DPSC) por hidrólise enzimática. Essas células foram comparadas às DPSCs isoladas pelo método de explante para analisar suas propriedades de células-tronco e de diferenciação.
A Dispase^® II foi usada para a classificação de células ativadas por fluorescência (FACS). Também tem sido usado para separar as camadas do saco vitelino visceral.
Adequado para uso na preparação de suspensão de célula única para sequenciamento.

Ações bioquímicas/fisiológicas

A Dispase^® II é uma protease neutra que hidrolisa as ligações peptídicas N-terminais de resíduos de aminoácidos não polares. Ela pode ser usada para separar muitos tecidos e células cultivados in vitro. A enzima é bastante branda e não danifica as membranas celulares. Ela também pode ser usada para evitar aglutinação em culturas em suspensão. Essa protease cliva a fibronectina e o colágeno tipo IV, mas não a laminina, o colágeno tipo V, a albumina sérica ou a transferrina. A Dispase^® II é específica para a clivagem de ligações leucina-fenilalanina. Ca²⁺, Mg²⁺, Mn²⁺, Fe²⁺, Fe³⁺ e Al³⁺ ativam a enzima. EDTA, EGTA, Hg²⁺ e outros metais pesados inibem a atividade enzimática. A enzima contém 1 g de átomos de zinco por g-mol de enzima purificada. Se este componente de zinco for removido por agentes quelantes, como EDTA ou EGTA, obtém-se uma apoenzima inativa. A enzima não é inibida pelo soro.

Definição da unidade

Uma unidade hidrolisará a caseína para produzir cor equivalente a 1,0 μmol (181 μg) de tirosina por minuto em pH 7,5 a 37 °C (cor por reagente de Folin-Ciocalteu), salvo indicação em contrário.

forma física

pó liofilizado contendo acetato de cálcio e açúcar de leite

Nota de preparo

Uma solução-estoque de 50 U/ml pode ser preparada dissolvendo-se o pó em um tampão com NaAc 10 mM (pH 7,5) e CaAc 5 mM. Ela deve ser armazenada a 4 °C.

Nota de análise

Inicialmente, a enzima pode ser dissolvida em Hepes/KOH 50 mM pH 7,4, NaCl 150 mM a 10 mg/ml. Diluições posteriores devem ser feitas nos meios de cultura celular mais adequados para as células sendo dissociadas. A Dispase é uma metaloproteinase ativada por cátions divalentes, inclusive Ca2⁺, Mg2⁺, Mn2⁺ e Fe2⁺.

Informações legais

Dispase is a registered trademark of Godo Shusei Co., Ltd.

Informações de segurança

• Pictogramas: GHS07,GHS08
• Palavra indicadora: Danger
• Frases de perigo: H315 - H319 - H334 - H335
• Declarações de precaução: P261 - P264 - P271 - P280 - P302 + P352 - P305 + P351 + P338
• Classificações de perigo: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• Órgãos-alvo: Respiratory system
• Código de classe de armazenamento: 11 - Combustible Solids
• Classe de risco de água (WGK): WGK 3
• Ponto de fulgor (°F): Not applicable
• Ponto de fulgor (°C): Not applicable