ENDOARGS-RO

Endoproteinase Asp-N de grau para sequenciamento

from Pseudomonas fragi

• Sinônimo(s): protease
• Número da licença da enzima: 3.4.24.33 (BRENDA, IUBMB)
• Código UNSPSC: 12352204

Propriedades

• Ensaio: ≥90% (SDS-PAGE)
• forma: lyophilized
• atividade específica: ≥20000 units/mg protein
• peso molecular: 27 kDa
• embalagem: pkg of 2 μg (11420488001); pkg of 3 × 2 μg (11054589001)
• fabricante/nome comercial: Roche
• pH ideal: 7.0-8.0
• faixa de pH: 6.5-9.0
• temperatura de armazenamento: 2-8°C

Descrição

Descrição geral

O tipo selvagem de Pseudomonas fragi secreta uma metaloprotease, que cliva ligações peptídicas no N-terminal em aminoácidos hidrofílicos pequenos. Um mutante dessa linhagem produz a endoproteinase Asp-N de grau para sequenciamento, que é isolada como uma protease altamente purificada e específica.

Especificidade

A endoproteinase Asp-N de grau para sequenciamento é uma metaloprotease. Em tampões fosfato, acetato ou Tris em pH 6,0-8,5, ela cliva especificamente ligações peptídicas em ácido aspártico e cisteico N-terminal. Se a cisteína for reduzida ou alquilada, apenas -↓-Asp-X é clivado.
A especificidade da endoproteinase Asp-N de grau para sequenciamento é verificada usando o glucagon como substrato. Altas concentrações de endoproteinase Asp-N de grau para sequenciamento (1 parte por peso de enzima com 10 partes por peso de glucagon) são incubadas para detectar vestígios de impurezas, como proteases contaminantes.
Inativação térmica: A protease é interrompida por meio de ebulição por 5 minutos.

Aplicação

Use a Endoproteinase Asp-N de grau para sequenciamento para análise da estrutura proteica e análise de sequências.

Nota de preparo

Concentração de trabalho: 2 μg /50 μl de água bidestilada
Um frasco (= 2 μg de enzima) é dissolvido em 50 μl de água bidestilada, resultando em uma concentração de tampão de Tris-HCl 10 mM, pH 7,5.
Solução de trabalho: O solvente recomendado é água bidestilada.
Condições de armazenamento (solução de trabalho): -15 a -25 °C
A solução em água bidestilada é estável por 1 semana a um máximo de 2 a 8 °C e por cerca de 1 mês a -15 a -25 °C; o descongelamento repetido deve ser evitado.

Reconstituição

A endoproteinase Asp-N de grau para sequenciamento liofilizada é reconstituída em 50 μl de água duplamente destilada. Isso resulta em uma concentração de tampão de Tris-HCl 10 mM, pH 7,5. Para evitar a autólise, a temperatura de incubação não deve exceder 37 °C.

Outras notas

Somente para fins de pesquisas biológicas. Não é destinado ao uso em procedimentos diagnósticos.

Informações de segurança

• Código de classe de armazenamento: 11 - Combustible Solids
• Classe de risco de água (WGK): WGK 1
• Ponto de fulgor (°F): does not flash
• Ponto de fulgor (°C): does not flash