ABN249
Anticorpo Antiadutos de Michael HNE, reduzido
serum, from rabbit
Sinônimo(s):
Reduced 4-hydroxy-trans-2-nonenal Michael adducts, Reduced HNE Michael adducts
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About This Item
Código UNSPSC:
12352203
eCl@ss:
32160702
Produtos recomendados
fonte biológica
rabbit
Nível de qualidade
forma do anticorpo
serum
tipo de produto de anticorpo
primary antibodies
clone
polyclonal
reatividade de espécies
bovine, human
técnica(s)
western blot: suitable
Condições de expedição
ambient
modificação pós-traducional do alvo
unmodified
Descrição geral
Aldeídos reativos gerados durante a peroxidação de lipídios contribuem para o dano celular e tecidual associado ao estresse oxidativo. Compostos carbonílicos alfa e beta-insaturados, tais como 4-hidroxi-2-nonenal (HNE), 4-oxo-2-nonenal (ONE) e acroleína, gerados a partir da oxidação de ácidos graxos poli-insaturados (AGPIs), interagem prontamente com os grupos nucleofílicos nas proteínas, levando à reticulação intramolecular ou intermolecular de proteínas. Existem dois tipos de modificações de HNE, o primeiro tipo é formado por uma reação 1:1 de aduto de Michael de lisina-amina, histidina-imidazol ou cisteína-sulfidrila, enquanto o segundo tipo é produzido por um HNE que reage simultaneamente com dois grupos amina livres de duas N-alfa-acetil-lisinas (NALs), ou seja, o chamado aduto de Michael-base de Schiff. No último caso, a razão inicial de 2:1 de lisina não fluorescente de aduto de Michael de lisina-HNE-base de Schiff sofre ainda ciclização oxidativa para formar um derivado fluorescente 2-hidroxi-3-imino-1,2-di-hidropirrol comumente denominado de fluoróforo de HNE. O aduto de Michael de HNE-Lis formado de modo reversível não é estável e, com frequência, usa-se redução por boro-hidreto de sódio (NaBH4) para preservar a modificação de Lis-HNE em amostras de proteína. A estabilização redutiva pelo tratamento com NaBH4 também é usada para impedir a perda de 4-HNE do aduto de Michael de 4-HNE-Cis por retrorreação de adição de Michael (do inglês, RMA) durante MS/MS com dissociação induzida por colisão (do inglês, CID) e com dissociação por transferência de elétrons (do inglês, ETD).
Especificidade
A modificação do alvo não é específica para uma determinada espécie.
Este antissoro policlonal detectou BSA modificado por HNE somente depois, e não antes, da redução por boro-hidreto de sódio.
Imunogênio
KLH modificado por HNE quimicamente reduzido por boro-hidreto de sódio.
Aplicação
Notas de aplicação:
1. ABN249 substitui 393207 da Calbiochem. É esperado que o ABN249 funcione em imunocitoquímica e imuno-histoquímica. Consulte as 393207 citações a seguir como exemplos de preparo de amostras e detecção nesses dois tipos de aplicações:
Usatyuk, P.V., et al. (2006). J. Biol. Chem. 281(46):35554-35566 (imunocitoquímica).
McCormack, A.L., et al. (2005). J. Neurochem. 93(4):1030-1037 (imuno-histoquímica).
2. O antifluoróforo de HNE, N.º do cat. 393206, também está disponível para a detecção do fluoróforo de HNE por ELISA, imuno-histoquímica e western blot.
3. Para gerar um controle positivo para western blot, trate uma solução de BSA de 2 mg/ml em KH2PO4 10 mM, pH 7,4, com HNE 0,1 a 0,5 mM e incube por 1 h a 37 °C. A reação pode ser monitorada pela diminuição da absorbância de HNE em 224 nm (coeficiente de extinção 13.750/M). O HNE livre pode ser removido pela filtração em gel e diálise após a reação química.
Adutos de Michael com HNE em soluções proteicas devem ser quimicamente reduzidos por boro-hidreto de sódio (NaBH4) antes da análise usando ABN1348. Uma solução de NaBH4 100 mM recém-preparada em NaOH 1 mM é adicionada na proporção de 1:9 (V:V) à solução de amostra de proteínas para uma concentração final de NaBH4 de 10 mM. A solução proteica é mantida em temperatura ambiente por 10 a 30 min antes da supressão com a adição de 5 a 10 equivalentes molares de acetona.
1. ABN249 substitui 393207 da Calbiochem. É esperado que o ABN249 funcione em imunocitoquímica e imuno-histoquímica. Consulte as 393207 citações a seguir como exemplos de preparo de amostras e detecção nesses dois tipos de aplicações:
Usatyuk, P.V., et al. (2006). J. Biol. Chem. 281(46):35554-35566 (imunocitoquímica).
McCormack, A.L., et al. (2005). J. Neurochem. 93(4):1030-1037 (imuno-histoquímica).
2. O antifluoróforo de HNE, N.º do cat. 393206, também está disponível para a detecção do fluoróforo de HNE por ELISA, imuno-histoquímica e western blot.
3. Para gerar um controle positivo para western blot, trate uma solução de BSA de 2 mg/ml em KH2PO4 10 mM, pH 7,4, com HNE 0,1 a 0,5 mM e incube por 1 h a 37 °C. A reação pode ser monitorada pela diminuição da absorbância de HNE em 224 nm (coeficiente de extinção 13.750/M). O HNE livre pode ser removido pela filtração em gel e diálise após a reação química.
Adutos de Michael com HNE em soluções proteicas devem ser quimicamente reduzidos por boro-hidreto de sódio (NaBH4) antes da análise usando ABN1348. Uma solução de NaBH4 100 mM recém-preparada em NaOH 1 mM é adicionada na proporção de 1:9 (V:V) à solução de amostra de proteínas para uma concentração final de NaBH4 de 10 mM. A solução proteica é mantida em temperatura ambiente por 10 a 30 min antes da supressão com a adição de 5 a 10 equivalentes molares de acetona.
O anticorpo antiadutos de Michael de HNE, reduzidos, N.º do cat. ABN249, é um anticorpo policlonal de coelho altamente específico direcionado à forma reduzida dos adutos de Michael de 4-hidroxi-2-noneal e foi testado em western blot.
Qualidade
Avaliado por western blot em HNE-BSA reduzido.
Análise de western blot: uma proporção de 1:10.000 deste anticorpo detectou 10 ng de BSA modificado por HNE somente depois, e não antes, da redução por boro-hidreto de sódio.
Análise de western blot: uma proporção de 1:10.000 deste anticorpo detectou 10 ng de BSA modificado por HNE somente depois, e não antes, da redução por boro-hidreto de sódio.
Descrição-alvo
Variável dependendo do(s) tamanho(s) da(s) proteína(s) modificada(s) por HNE. Bandas não caracterizadas podem ser observadas em um ou mais lisados.
Ligação
Substitui: 393207 da Calbiochem
Nota de análise
Controle
BSA modificado por HNE quimicamente reduzido por boro-hidreto de sódio.
BSA modificado por HNE quimicamente reduzido por boro-hidreto de sódio.
Outras notas
Concentração: consulte a ficha de informações específica do lote.
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Código de classe de armazenamento
12 - Non Combustible Liquids
Classe de risco de água (WGK)
WGK 1
Ponto de fulgor (°F)
Not applicable
Ponto de fulgor (°C)
Not applicable
Certificados de análise (COA)
Busque Certificados de análise (COA) digitando o Número do Lote do produto. Os números de lote e remessa podem ser encontrados no rótulo de um produto após a palavra “Lot” ou “Batch”.
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