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Genopure质粒中提试剂盒

kit of for 20 isolations from 5 to 30 ml

• 同義詞: 质粒隔离
• 分類程式碼代碼: 41105500
• NACRES: NA.55

屬性

• 品質等級: 100
• 製造商／商標名: Roche
• 包裝: kit of for 20 isolations from 5 to 30 ml

描述

一般說明

用50 μg纯化的质粒测试质粒回收率。回收率>90%且超螺旋形式超过80％。通过从DH5a细胞中分离pBS对质粒DNA的产量进行了测定。从30ml A600密度为在3和6之间的培养物中获得了>85 μg的质粒DNA。

（通过检测A260/A280比例得出）纯度为1.8 + 0.2。

没有检测到RNA。

已经根据目前的质量控制过程测试了试剂盒组分中没有核酸酶。

應用

Genopure质粒中抽试剂盒可从细菌培养液中制备中量级的转染级质粒DNA（最高100 μg质粒）。分离的质粒适用于绝大多数分子生物学应用：

• 转染
• Southern blotting
• 测序
• PCR
• 限制性分析
• 克隆

特點和優勢

Genopure质粒中抽试剂盒使用了改良的碱性裂解法制备中等量的高纯度质粒DNA。

• 使用即用型试剂，节省时间。

最多可纯化20个样品（10分钟手动操作/总共75分钟）。

• 可纯化所有大小和类型的质粒，

甚至是BAC DNA，因为可以过滤粗裂解物以避免质粒剪切。

• 可并行处理多个样本

使用高速重力流动柱。

• 无需使用有害的有机化合物

如氯化铯、苯酚、氯仿和溴化乙锭。

• 所得质粒DNA的纯度高于

通过2×氯化铯梯度离心制备的质粒。

成分

• 悬浮缓冲液
• RNase A
• 裂解缓冲液
• 中和缓冲液
• 平衡缓冲液
• 洗涤缓冲液
• 洗脱缓冲液
• NucleoBond AX 100色谱柱
• 折叠式过滤器（直径150 mm）
• 密封圈

品質

已对使用该试剂盒纯化得到的质粒DNA进行了限制性酶切消化测试；根据实验方案所述方法从转化HB101中分离得到pUC 19。如琼脂糖凝胶分析所示，在+ 37℃下使用1单位Msp I将1μg质粒完全酶解2小时。

用50μg纯化质粒测试质粒回收率。超螺旋形式大于80%时，回收率高于90％。通过从DH5a细胞中分离pBS，确定质粒DNA的产量。从A600密度为3-6的30 ml培养物中，获得超过85μg的质粒DNA。

纯度（利用A₂₆₀/A₂₈₀比率进行检测）为1.8±0.2。

利用通过标准方法纯化并通过琼脂糖凝胶电泳检测的3 μg pBS分析RNA污染。结果未检测到RNA。

已经根据当前的质量控制流程，检测发现试剂盒组分不含核酸酶。

準備報告

分离流程基于改良的碱性裂解法，可分为以下步骤：细菌被部分裂解，使质粒DNA透过细胞壁进入上清液。较大的大肠杆菌染色体DNA被困在细胞壁中。通过过滤或离心，除去裂解物中的细胞碎片，并将含有质粒DNA的组分上样到预平衡柱上。由于净化的裂解物溶于低盐缓冲液后再上样到柱上，使得质粒DNA与柱中的大孔阴离子交换材料结合。用高盐洗涤液从柱上洗脱细胞杂质。 最后，从柱上洗脱质粒DNA。将回收的DNA从洗脱液中沉淀出来，以除去盐并浓缩质粒。

分析報告

样品：
含有高拷贝数质粒的大肠杆菌培养物：5至30mL细菌培养物
含有低拷贝数质粒的大肠杆菌培养物：100至100mL细菌培养物
质粒大小：分离流程适用于所有大小的质粒。注意：较大构建体（高达100 kb）的裂解液应通过过滤而不是离心来净化，以避免剪切质粒。
所需时间：60分钟（包括过滤裂解液）
一般产量：
高拷贝数质粒：3至5 μg/mL培养物
低拷贝数质粒：0.2至1 μg/mL培养物
产物纯度：分离的质粒DNA不含其他细菌成分，包括RNA。

其他說明

离子交换色谱

仅用于生命科学研究。不可用于诊断。

安全資訊

• 象形圖: GHS02,GHS05
• 訊號詞: Danger
• 危險聲明: H226 - H290 - H314
• 防範說明: P210 - P280 - P303 + P361 + P353 - P304 + P340 + P310 - P305 + P351 + P338 + P310 - P370 + P378
• 危險分類: Eye Dam. 1 - Flam. Liq. 3 - Met. Corr. 1 - Skin Corr. 1
• 儲存類別代碼: 3 - Flammable liquids
• 水污染物質分類（WGK）: WGK 1
• 閃點（°F）: 100.4 °F
• 閃點（°C）: 38 °C