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03143422001

Roche

Genopure 质粒大提试剂盒

kit of for 10 isolations from 30 to 150 ml

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About This Item

分類程式碼代碼:
41105500
NACRES:
NA.55

品質等級

製造商/商標名

Roche

包裝

kit of for 10 isolations from 30 to 150 ml

一般說明

用于大规模(maxi)制备质粒DNA。

應用

Genopure质粒大提试剂盒可用于从细菌培养物中大量制备转染级质粒DNA(最多500μg质粒)。分离得到的质粒适用于大多数分子生物学应用:

  • 转染
  • Southern印迹
  • 测序
  • PCR/长片段PCR
  • 限制性酶切消化
  • 克隆

特點和優勢

Genopure质粒大提试剂盒使用改良的碱性裂解法,可大量制备高纯度的质粒DNA。

  • 使用即用型试剂,节省时间。
最多可纯化10个样品(10分钟手动操作/总共75分钟)。
  • 可纯化所有大小和类型的质粒
甚至是BAC DNA,因为可以过滤粗裂解物以避免质粒剪切。
  • 可并行处理多个样本
使用高速重力流动柱。
  • 无需使用有害的有机化合物
如氯化铯、苯酚、氯仿和溴化乙锭。
  • 所得质粒DNA的纯度高于
通过2×氯化铯梯度离心制备的质粒。

成分

  • 悬浮缓冲液
  • RNase A
  • 裂解缓冲液
  • 中和缓冲液
  • 平衡缓冲液
  • 洗涤缓冲液
  • 洗脱缓冲液
  • NucleoBond AX 500色谱柱
  • 折叠式过滤器(直径240 mm)
  • 密封圈

品質

已对使用该试剂盒纯化得到的质粒DNA进行了限制性酶切消化测试;根据实验方案所述方法从转化HB101中分离得到pUC 19。如琼脂糖凝胶分析所示,在+ 37℃下使用1单位Msp I将1μg质粒完全酶解2小时。

用250μg纯化质粒测试质粒回收率。超螺旋形式大于80%时,回收率高于90%。通过从DH5a细胞中分离pBS,确定质粒DNA的产量。从A600密度为3-6的150ml培养物中,获得超过400μg的质粒DNA。

纯度(利用A260/A280比率进行检测)为1.8±0.2。

利用通过标准方法纯化并通过琼脂糖凝胶电泳检测的3 μg pBS分析RNA污染。结果未检测到RNA。

已经根据当前的质量控制流程,检测发现试剂盒组分不含核酸酶。

準備報告

分离流程基于改良的碱性裂解法,可分为以下步骤:细菌被部分裂解,使质粒DNA透过细胞壁进入上清液。较大的大肠杆菌染色体DNA被困在细胞壁中。通过过滤或离心,除去裂解物中的细胞碎片,并将含有质粒DNA的组分上样到预平衡柱上。由于净化的裂解物溶于低盐缓冲液后再上样到柱上,使得质粒DNA与柱中的大孔阴离子交换材料结合。用高盐洗涤液从柱上洗脱细胞杂质。 最后,从柱上洗脱质粒DNA。将回收的DNA从洗脱液中沉淀出来,以除去盐并浓缩质粒。

分析報告

样品:
含有高拷贝数质粒的大肠杆菌培养物:30至150mL细菌培养物
含有低拷贝数质粒的大肠杆菌培养物:100至500mL细菌培养物
质粒大小:分离流程适用于所有大小的质粒。注意:较大构建体(高达100 kb)的裂解液应通过过滤而不是离心来净化,以避免剪切质粒。
所需时间:75分钟(包括过滤裂解液)
一般产量:
高拷贝数质粒:3至5 μg/mL培养物
低拷贝数质粒:0.2至1 μg/mL培养物
产物纯度:分离的质粒DNA不含其他细菌成分,包括RNA。

其他說明

仅用于生命科学研究。不可用于诊断。

象形圖

FlameCorrosion

訊號詞

Danger

危險聲明

危險分類

Eye Dam. 1 - Flam. Liq. 3 - Met. Corr. 1 - Skin Corr. 1

儲存類別代碼

3 - Flammable liquids

水污染物質分類(WGK)

WGK 1

閃點(°F)

100.4 °F

閃點(°C)

38 °C


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