- Produkty
- Właściwości fizyczne
- Specyficzność i kinetyka
- Inhibitory
- Substraty
- Rozpuszczalność i stabilność roztworu
Właściwości fizyczne
Masa cząsteczkowa: 25 kDa1 (Bovine)
pI: 8.752 (Bydło)
Współczynnik ekstynkcji: E1%= 20,4 (280nm)
Chymotrypsyna jest wytwarzana w komórkach gruczołowych trzustki jako nieaktywny prekursor, chymotrypsynogen. α-Chymotrypsyna jest dominującą formą aktywnego enzymu wytwarzanego z jej zymogenu, chymotrypsynogenu A.
In vivo, szybkość hydrolizy zymogenu przez trypsynę i autolizę wytwarza różne ilości wariantów α, π, δ i γ.3 α-Chymotrypsyna jest proteazą serynową z rodziny peptydaz S1 składającą się z 241 reszt aminokwasowych. Cząsteczka ma trzy łańcuchy peptydowe: łańcuch A składający się z 13 reszt, łańcuch B składający się ze 131 reszt i łańcuch C składający się z 97 reszt.4

Rysunek 1.Właściwości fizyczne
Specyficzność i kinetyka
α-Chymotrypsyna z trzustki bydlęcej selektywnie katalizuje hydrolizę wiązań peptydowych po C-końcowej stronie tyrozyny, fenyloalaniny, tryptofanu i leucyny. Wtórna hydroliza zachodzi również po C-końcowej stronie metioniny, izoleucyny, seryny, treoniny, waliny, histydyny, glicyny i alaniny.1
Optymalne pH: 7,88
(pH 6,0: około 35% maksymalnej aktywności, pH 9,3: 40% maksymalnej aktywności)8
Optymalna temperatura: 50 °C9
.Rozpuszczalność i stabilność roztworu
Chymotrypsyna jest zazwyczaj rozpuszczalna w 1 mM HCl (2 mg/ml), dając klarowny roztwór.2, podzielić na porcje i przechowywać w temperaturze -20 °C. Autoliza nastąpi w przypadku przechowywania w wyższym pH. Obecność wapnia jest również stabilizatorem.5 Zamrożone podwielokrotności są stabilne przez około 1 tydzień. Chymotrypsyna jest zarówno aktywowana, jak i stabilizowana przez Ca2+. Enzym jest aktywny w obecności 0,1% SDS i 2 M chlorowodorku guanidyny.
Zastosowania
Do trawienia peptydów należy stosować stosunek (w/w) około 1:60 dla chymotrypsyny:peptyd. Przeprowadzać trawienie peptydów w 100 mM Tris HCl zawierającym 10 mM CaCl2, pH 7,8, w temperaturze 30 °C. Samotrawienie może wystąpić, jeśli stosowane są temperatury powyżej 37 °C. Znany peptyd, taki jak melityna, powinien być stosowany jako kontrola we wszystkich eksperymentach. Inkubować do 24 godzin w temperaturze 37-40 °C. Trawienie można zakończyć dostosowując pH do 2.0.6,7
Referencje
Zaloguj się lub utwórz konto, aby kontynuować.
Nie masz konta użytkownika?