Ludzkie komórki nabłonkowe kanalików proksymalnych nerki (RPTEC)

Korzyści ze stosowania SA7K, klonu RPTEC:

• Funkcjonalne transportery wychwytu i wypływu, w tym OAT1, OAT3, OCT2, MDR1, MRP2, MRP4, MATE1 i MATE2K
• Zwalidowane ze znanymi nefrotoksynami
• Kompatybilność z modelami 3D do badań toksyczności
• Kompatybilność z modelami 3D do badań toksyczności./li>
• Kompatybilny z modelami 3D do badań toksyczności
• Solidna charakterystyka wzrostu
• Powtarzalne wyniki

Rysunek 1. Ludzkie komórki nabłonkowe kanalików proksymalnych nerek (RPTEC) są powszechnie stosowane do przewidywania przepuszczalności leków przez nerki i do badania wypływu leków. Wygenerowaliśmy linie komórkowe z nokautem transportera (KO) przy użyciu technologii CompoZr^® Zinc Finger Nuclease (ZFN) w zastrzeżonej linii komórkowej nabłonka kanalików proksymalnych nerki.

Modele i zastosowania transporterów leków RPTEC

Człowiecze komórki nabłonkowe kanalików proksymalnych nerek (RPTEC) są powszechnie stosowane do przewidywania przepuszczalności leków przez ludzkie nerki i do badania wypływu leków. Jednak obecne metody badania interakcji lek-transporter obejmują inhibitory lub metody knockdown, które często są niespecyficzne lub nieskuteczne. Aby temu zaradzić, stworzyliśmy modele RPTEC z nokautem (KO) transporterów leków przy użyciu technologii CompoZr^® Zinc Finger Nuclease (ZFN). CompoZr^® ZFN to szybki i niezawodny sposób manipulowania genomem w wysoce specyficzny i precyzyjny sposób. Linie komórkowe RPTEC KO transportera eliminują niejednoznaczność niespecyficznych substratów i inhibitorów, zapewniając dokładniejszy i bardziej przewidywalny model interakcji lek-transporter.

Oceniono aktywność funkcjonalną zarówno OCT2, jak i transporterów OAT1 i OAT3 w klonie RPTEC SA7K. Substraty OCT2 obejmowały amantadynę, N-metylofenylopirydynię (MPP), trietyloaminę (TEA) i YM155. Jako inhibitory zastosowano doksepinę i werapamil. W przypadku transporterów OAT1 i OAT3 substraty obejmowały 6-karboksyfluoresceinę (6-CF) i p-aminohipuran (PAH), a jako inhibitor zastosowano probenecyd. Aktywność zarówno OCT2, jak i transporterów OAT1 i OAT3 obserwowano w obecności odpowiedniej macierzy zewnątrzkomórkowej (ECM) (Ryc. 2). Na poparcie znaczenia warunków hodowli dla tych testów, zwiększone poziomy ekspresji mRNA dla kilku kluczowych transporterów leków w komórkach SA7K zaobserwowano podczas hodowli na płytkach pokrytych fibronektyną z nakładką ECM (Rysunek 3).

Wyniki absorpcji transporterów leków

Rysunek 2. Testy funkcji transportera SA7K. Testy przeprowadzono w 24-dołkowych płytkach z lub bez ECM. Inhibitory inkubowano wstępnie przez 10 minut przed dodaniem substratów. Po inkubacji przez 10 minut, wychwyt mierzono metodą LC-MS/MS.

A-D. Transporter OCT2: Stężenia wszystkich badanych związków (substratów i inhibitorów) wynosiły 10 μM. E-F.
Transporter OAT1 i OAT3: Stężenia substratów wynosiły 10 μM dla PAH i 50 μM dla 6-CF. Stężenia inhibitorów były takie, jak wskazano w odpowiednim panelu.
 

Ekspresja genów kluczowych transporterów leków

Rysunek 3. Zwiększona ekspresja genów w obecności nakładki ECM. Analiza ekspresji genów metodą qRT-PCR wykazała 20-krotny wzrost dla MATE1, 100-krotny dla MATE2K, 10-krotny dla OCT2, 1,5-krotny dla MRP2 i 3-krotny dla transporterów MRP4 w trakcie inkubacji trwającej do 11 dni.

Zastosowania modeli nerek 3D

Kanalik proksymalny jest głównym celem toksyczności leków, która musi być oceniana podczas procesu opracowywania leków. Opracowaliśmy funkcjonalne modele 3D kanalików proksymalnych z zaawansowanymi cechami nabłonka nerkowego, które mogą być wykorzystywane do badań przesiewowych leków pod kątem toksyczności dla nerek. Testy nefrotoksyczności, integralności bariery, testy żywotności i obrazowanie można wykonać w ciągu zaledwie jednego tygodnia przy użyciu komórek RPTEC SA7K wysianych na zatwierdzonej platformie hodowli komórkowej 3D (Rysunek 4).

Rysunek 4. Przykładowy przebieg badania nefrotoksyczności z wykorzystaniem komórek RPTEC SA7K na 3-pasmowej płytce do hodowli komórkowej 3D Mimetas OrganoPlate^®.

Model nefrotoksyczności na 3-pasmowej płytce do hodowli komórek 3D Mimetas OrganoPlate^® 

• Stwórz funkcjonalne kanaliki nerkowe dla ludzkiego modelu nerki na chipie
• Tworzenie funkcjonalnych, spolaryzowanych kanalików nerkowych dla ludzkiego modelu nerki na chipie
• Ocena wpływu związków nefrotoksycznych na 40 równolegle hodowanych kanalików nerkowych utworzonych przy użyciu ludzkiej linii komórkowej RPTEC SA7K
• Twórz multipleksowe, nieinwazyjne testy (żywotności) w formacie mikroprzepływowym
• Używaj płytki do hodowli komórkowych OrganoPlate^® z większością czytników płytek, mikroskopów i zrobotyzowanych urządzeń manipulacyjnych

Model nerki na chipie do hodowli komórek AIM Biotech:

• Utworzenie spolaryzowanego kanalika z komórek RPTEC SA7K o niskiej przepuszczalności
• Badanie związków pod kątem nefrotoksyczności poprzez testy integralności bariery
• Zaprojektuj funkcjonalny test klirensu nerkowego w 3D
• Przeprowadź łatwe obrazowanie fluorescencyjne dzięki optycznie przezroczystemu chipowi
• Przeprowadź testy w warunkach statycznych, nie jest wymagany dodatkowy sprzęt ani pompa<

Podłoża i suplementy RPTEC

• Zoptymalizowane do hodowli linii komórkowych kontrolnych i KO RPTEC
• Łatwe przygotowanie podłoża - wystarczy rozmrozić, wymieszać i użyć. wystarczy rozmrozić, wymieszać i użyć
• Najwyższa wydajność i spójne wyniki w testach na nefrotoksyczność i aktywność transportera
• Kompatybilny zarówno z kulturami 2D, jak i 3D