Protokół cOmplete™, Mini, bez EDTA

Nr produktu 11836170001

Protokół

Kompletny, Mini, bez EDTA: Ile dodać do próbek surowicy?

Rozpuścić jedną tabletkę w 10 ml buforu wodnego lub wody. W przypadku wysokiej aktywności proteolitycznej rozpuścić jedną tabletkę w 7 ml buforu.

cOmplete Inhibition of Endoproteinase Asp-N

cOmplete hamuje metaloproteazę endoproteinazę Asp-N.

cOmplete tabletki do stosowania w przygotowywaniu frakcji subkomórkowych z jelita

Nie zostało to przetestowane, ale powinno działać.

Użycie tabletek cOmplete w hodowli komórkowej

Zastosowanie może polegać na ekspresji/produkcji białka, które jest bardzo wrażliwe na proteazy.

cOmplete Protease Inhibitor Cocktail może być stosowany do hamowania proteaz w pożywce/supernatancie hodowli komórkowych. Tabletki cOmplete zawierają składniki, które są przepuszczalne dla błon, ale nie wszystkie są przepuszczalne dla błon. Ponadto składniki o niskiej masie cząsteczkowej, które mogą wnikać do komórek, nie zostały przebadane pod kątem cytotoksyczności.

Kilku klientów zgłosiło skuteczne stosowanie tabletek cOmplete w hodowlach komórkowych w rozcieńczeniu od jednej trzeciej do jednej czwartej stężenia roboczego wskazanego w ulotce dołączonej do opakowania. Aby określić przydatność tabletek cOmplete do konkretnego zastosowania, należy empirycznie przetestować różne stężenia.

Wpływ inhibitora cOmplete na nukleazy, takie jak DNaza I i RNaza A

Firma Roche nie przeprowadziła systematycznych badań wpływu tabletek cOmplete Protease Inhibitor Cocktail Tablets na DNazę I i RNazę A.

EDTA jest chelatorem dwuwartościowym i może inaktywować nukleazy, takie jak Mg²⁺ wymagane do aktywności DNazy I. Chociaż niskie stężenia EDTA są obecne w buforach reakcyjnych wielu endonukleaz restrykcyjnych, najlepszym rozwiązaniem może być stosowanie tabletek cOmplete niezawierających EDTA.

Wpływ cOmplete na fosfatazy

cOmplete Protease Inhibitor Cocktail Tablets nie były systematycznie testowane pod kątem hamowania fosfataz przez firmę Roche.

Wiadomo, że EDTA hamuje fosfatazę alkaliczną, więc jak wskazano powyżej, najlepszym rozwiązaniem może być stosowanie tabletek z inhibitorem proteazy cOmplete bez EDTA.

Usuwanie cOmplete z preparatów za pomocą dializy

Używaj błony dializacyjnej z odcięciem >10 kDa.

.