Dwa rozpuszczalniki (dioksan, DMAc), mocna zasada (NaOt-Bu) Przewodnik krok po kroku dla zestawu do badań przesiewowych reakcji aminowania Buchwalda-Hartwiga

1 zasada  (NaOt-Bu, 2 M w THF)
2 rozpuszczalniki (1,4-dioksan i DMAc)
12 wstępnie zważonych katalizatorów

Wymagane materiały - konfiguracja:

• 1 torebka mylarowa z KitAlysis™ Buchwald-Hartwig Amination Reaction Screening Kit i będziesz używać następujących komponentów
  - 12 x 2 wstępnie zważone katalizatory w szklanych fiolkach z mieszadłami i matą zamykającą
  - 2 puste fiolki reakcyjne o pojemności 4 ml
• 1 NOWOŚĆ KitAlysis™ 24-dołkowa folia zastępująca blok reakcyjny
• -po 1 (2 ml) ampułce 1,4-dioksanu i DMAc (w pudełkach na ampułki)
• 2 NOWE pręty mieszające
• KitAlysis™ 24-dołkowy blok reakcyjny (sprzedawany oddzielnie)
• KitAlysis™<
• KitAlysis™ Benchtop Inertion Box (sprzedawany oddzielnie) lub pudełko na rękawiczki/torba na rękawiczki
• KitAlysis™ Torque Screwdriver Set (sprzedawany oddzielnie)

Dodatkowe (niedołączone) wymagane elementy:

• Pipeta (0-100 µL) i końcówki
• 2 (1 mL) strzykawki z długimi igłami
• Halogenek arylu i amina
• Nitrogen (lub Argon): z linii wyciągowej lub zbiornika
• 1 płyta grzejna z możliwością mieszania
• 1 płyta mieszająca (lub płyta grzejna do użycia bez ogrzewania)
• Fiolki HPLC, 96-dołkowy blok automatycznego próbnika HPLC lub płytki TLC.

Roztwory i zawiesiny do przygotowania: Przejdź do strony konfiguracji użytkownika online, aby wprowadzić masy cząsteczkowe do pliku Excel do pobrania.

Procedura konfiguracji:
(Zobacz KitAlysis™ video dla przydatnych wizualizacji)

• Podgrzej płytę grzejną do 100 °C. Użyj łaźni olejowej lub drugiego bloku reakcyjnego, aby utrzymać temperaturę i uniknąć skoków.
• Jeśli podłoże jest wrażliwe na bazę, zmniejsz temperaturę do między 60 °C a 80 °C.
• Umieść  NOWY KitAlysis 24-dołkową folię zastępczą bloku reakcyjnego na pokrywie bloku reakcyjnego  i sprawdź, czy wszystkie otwory, w tym otwór sondy temperatury, pokrywają się z odpowiednimi otworami w folii
• Sprawdź wszystkie śruby, aby upewnić się, że nie są zerwane. Wymień wszystkie zerwane śruby na dostarczone zamienniki.
• Umieść KitAlysis™ Benchtop Inertion Box z rurką podłączoną do gazu obojętnego na drugiej, nieogrzewanej płytce mieszającej (patrz konfiguracja KitAlysis Benchtop Inertion Box w celu uzyskania szczegółowych informacji)
• Umieść KitAlysis™ 24-dołkowy blok reakcyjny z pokrywką w KitAlysis Benchtop Inertion Box. Rozpocząć przepływ azotu i przeciągnąć 5 minut. Pozostawić przepływ azotu do końca konfiguracji.
• Przygotować mieszaniny substratów bezpośrednio w pustych fiolkach reakcyjnych o pojemności 4 ml zgodnie z recepturą (dostarczoną w pliku Excel do pobrania) pomijając rozpuszczalnik i roztwór NaOt-Bu. Dodać jedno mieszadło do każdej fiolki z mieszaniną. Oznacz jako "Dioxane Substrate Mixture A" i "DMAc  Substrate Mixture B"). Jeśli amina jest lotna, dodaj ją jako ostatnią (po dodaniu mieszanin rozpuszczalników) bezpośrednio do wymaganych fiolek reakcyjnych za pomocą strzykawki z oddzielnej fiolki, która została szybko oczyszczona, a następnie zakorkowana przed umieszczeniem w Inertion Box.
• Częściowo otworzyć pokrywę KitAlysis™ Benchtop Inertion Box. Umieść "Dioxane Substrate Mixture A" w środkowym otworze po lewej stronie tacy dyfuzora Inertion Box. Umieść "DMAc Substrate Mixture B" w środkowym otworze po prawej stronie płytki. Takie umieszczenie fiolek pozwala na najlepszy przepływ gazu obojętnego (zdejmij pokrywki z mieszanin stałych przed umieszczeniem ich w zalecanych otworach, zachowując pokrywki w Inertion Box do późniejszego użycia w razie potrzeby).
• Przenieś zakorkowane, 24-fiolkowe, wstępnie załadowane katalizatory do bloku reakcyjnego, upewniając się, że załadowano je zgodnie z pasującym schematem na opakowaniu i bloku reakcyjnym. Pozostaw matę na urządzeniu.
• Używając krakera do ampułek, otwórz po 1 ampułce dioksanu, DMAc i roztworu NaOt-Bu i szybko umieść w otworach ampułek znajdujących się wzdłuż dna Inertion Box, poniżej bloku reakcyjnego.
• Gdy wszystkie składniki znajdą się w KitAlysis™ Benchtop Inertion Box, zamknij pokrywę i próżnuj przez dodatkowe 5 minut. Pozostawić przepływ azotu do końca konfiguracji.
• Dwukrotnie oczyścić igłę i strzykawkę w otworze dyfuzora azotu, pociągając, a następnie popychając tłok. Używając oczyszczonej igły i strzykawki, dodaj wymagane ilości rozpuszczalnika do otwartych fiolek z mieszaniną substratów. Nie dodawaj jeszcze roztworu NaOt-Bu do żadnej z mieszanin substratów - jest on dodawany oddzielnie jako ostatni.
• Mieszaj mieszaniny aż do uzyskania roztworu (1-2 min). W przypadku zawiesin, patrz "dodatkowe wskazówki" poniżej.
• Podczas mieszania mieszanin, ostrożnie zdejmij matę zamykającą z 24-fiolkowych, wstępnie załadowanych katalizatorów w bloku reakcyjnym.
• Dozuj 100 µL mieszaniny roztworu dioksanu do fiolek A1-A6 i fiolek B1-B6 zgodnie z poniższym schematem. Może pozostać bardzo niewielka ilość nadmiaru roztworu. Zachowaj go jako wzorzec reakcji dla HPLC/TLC później.
• Dozuj 100 µL mieszaniny roztworu DMAc do fiolek C1-C6 i fiolek D1-D6 zgodnie z poniższym schematem.

• Po dodaniu mieszanin rozpuszczalników dozuj 15 µl roztworu NaOt-Bu do każdej z 24 fiolek.
• Po dozowaniu wszystkich mieszanin substratów i bazy zgodnie z recepturą, weź pokrywę 24-dołkowego bloku reakcyjnego KitAlysis i wyrównaj śruby z otworami w płytce.Upewnij się, że otwory sondy temperatury znajdują się w jednej linii zarówno na pokrywie, jak i na bloku.
• Przykręć pokrywę zgodnie ze wskazówkami i wzorem przedstawionym w sekcji "dodatkowe wskazówki" poniżej. Przed wyjęciem KitAlysis™ 24-dołkowego bloku reakcyjnego z pudełka, upewnij się, że pokrywa jest równomiernie uszczelniona na podstawie. Wykonaj tę wizualną kontrolę, aby uniknąć konieczności odkręcania pokrywy i ponownego przykręcania.
• Po całkowitym uszczelnieniu wyjmij KitAlysis™ 24-dołkowy blok reakcyjny z pudełka. Umieścić na rozgrzanej płycie grzejnej z sondą przez pokrywę i włożoną do bloku. Ogrzewać w temperaturze 100°C przez noc, mieszając z prędkością 300 obr. Jeśli substrat jest wrażliwy na zasadę, obniżyć temperaturę do 60-80°C. Wyłącz dopływ azotu do pojemnika i pozbądź się wszelkich niewykorzystanych chemikaliów.
• Przygotuj roztwór gaszący w butelce z wymienną pokrywką zgodnie z poniższym przepisem do analizy HPLC. Możliwa jest również analiza TLC.

Receptura roztworu gaszącego

-49 mL CH₃CN

-1 mL AcOH

-15.4 mg bifenylu (KitAlysis™ wzorzec wewnętrzny dostarczony w zestawie)

Uwaga: Z tego przepisu uzyskuje się 50 ml roztworu podstawowego, co wystarcza do przeprowadzenia wszystkich czterech badań przesiewowych w zestawie KitAlysis™ Buchwald-Hartwig Amination Reaction Screening Kit.

• Postępuj zgodnie z poniższą procedurą roboczą

Procedura robocza i analiza

• Ochłodź blok reakcyjny. Zdejmij pokrywę za pomocą małego, nieobrotowego śrubokręta.
• Sprawdź każdą fiolkę pod kątem utraty rozpuszczalnika i zapisz.
• Dodaj 500 µL przygotowanego roztworu gaszącego do każdej fiolki.
• Założyć pokrywkę, dokręcić środkową śrubę i mieszać na płytce mieszającej (NO HEAT) przez 2-3 minuty. NIE ODWRACAĆ BLOKU.
• Po 5 minutach mieszania, pozostawić płytkę na 5 minut (bez mieszania), aby umożliwić nierozpuszczalnemu materiałowi osadzenie się z roztworu.
• Podczas gdy płytka odpoczywa, dodaj 700 µl acetonitrylu do każdej z 24 indywidualnie oznakowanych (A1, A2 itd.) fiolek HPLC lub do każdej z 24 studzienek 96-dołkowego bloku automatycznego próbnika HPLC/UPLC.
• Odkręć ostrożnie pokrywkę KitAlysis™ 24-dołkowego bloku reakcyjnego.
• Używając czystej pipety za każdym razem, usuń porcję 25 µL z każdej fiolki do odpowiednich fiolek HPLC lub bloku HPLC . Uważaj, aby wyciągnąć materiał z górnej części fiolek, aby uniknąć osadu.               
• Uruchom na automatycznym próbniku HPLC. Może być konieczne zoptymalizowanie stosunku próbki do współczynnika rozcieńczenia dla unikalnego systemu.

Dodatkowe wskazówki:

Uszczelnianie płytki - przykręcanie pokrywy

Prawidłowe uszczelnienie płytki ma kluczowe znaczenie dla sukcesu. Kluczem jest lekki, równomierny nacisk na pokrywę bloku, aby utrzymać pokrywę płasko podczas uszczelniania.

1. Dokręć śruby, upewniając się, że otwory sondy temperatury w podstawie i pokrywie są wyrównane w KitAlysis™ 24-dołkowym bloku reakcyjnym.
2. Wstępne płukanie: Używając kciuka i palca wskazującego, naciśnij pokrywę pudełka, aż zrówna się z fiolkami. Następnie, używając KitAlysis™ Śrubokręta dynamometrycznego, włóż śruby, aż zrównają się, ale nie dokręcą, z górną częścią pudełka, zgodnie z krzyżowym wzorem podanym poniżej. Sprawdź, czy pokrywa jest równomiernie przylegająca do podstawy ze wszystkich stron. Wykonaj tę wizualną kontrolę, aby uniknąć konieczności odkręcania pokrywy i ponownego wkręcania śrub.
3. Dokręcanie: Powtarzaj ten sam schemat, aż KitAlysis™ Torque Screwdriver "kliknie", wskazując na całkowite dokręcenie. Obejdź blok jeszcze raz, aby upewnić się, że wszystkie śruby są dokręcone.

Sonda do płyty grzejnej nie pasuje do otworu bloku reakcyjnego

Użyj małej łaźni olejowej lub innego metalowego bloku (dla uzyskania najlepszych wyników) z tyłu płyty grzejnej i umieść tam sondę. Umieść blok reakcyjny jak najbliżej środka płyty grzejnej, aby uzyskać bardziej równomierne mieszanie.

Dodawanie zawiesiny

Z powodu wąskiego otworu końcówek pipety, dodawanie zawiesiny spowoduje zablokowanie. Aby pomóc w równomiernym dozowaniu, należy odciąć koniec końcówki przy pierwszym znaczniku (~10 mm). Aby zapewnić równomierne rozproszenie porcji, bardzo ważne jest mieszanie mieszaniny podczas pobierania porcji w celu dozowania do odpowiedniej fiolki reakcyjnej.