Zamrażanie i rozmrażanie FBS i innych surowic

Przegląd sekcji

• Best Practices for Ensuring Stability and Performance of FBS and Sera
• Jak zamrażać i rozmrażać surowicę, aby zapewnić jej stabilność
• Chroń rozmrożone FBS i inne surowice dzięki bezpiecznemu chłodzeniu i przechowywaniu
  

Najlepsze praktyki zapewniające stabilność i wydajność FBS i surowic

Surowica zwierzęca jest idealnym źródłem składników odżywczych dla komórek w hodowli, ponieważ zawiera białka, lipidy, sole, witaminy, minerały, aminokwasy i inne składniki niezbędne do wzrostu. Przy prawidłowym przechowywaniu i obchodzeniu się z surowicą jej właściwości mogą być utrzymywane przez wiele lat. Niewłaściwe przechowywanie i/lub rozmrażanie produktów z surowicą może zmniejszyć nie tylko ich natychmiastową i długoterminową stabilność, ale także ich skuteczność.

Dane dotyczące promowania wzrostu pokazują, że surowica zachowuje swoje właściwości wspomagające wzrost przez cały okres przydatności do spożycia, jeśli jest prawidłowo przechowywana. Poniższa tabela zawiera dane dotyczące stabilności płodowej surowicy bydlęcej (FBS) przez okres pięciu lat. Aby zapewnić stabilność, surowice muszą być odpowiednio przechowywane i obsługiwane.

Długotrwałe przechowywanie SERA: wyniki testów

Multiple Passage to % wzrostu kontrolnego, podczas gdy Plating Efficiency (PE) i Cloning Efficiency (CE) to % PE i CE.

Produkt	Test	Rok 0	Rok 1	Rok 2	Rok 3	Rok 4	Rok 5
Rok 4	Rok 5
	Promieniowane FBS	Przebieg wielokrotny	110	104	116	126	93	90
		Plating Efficiency	61	36	51	35	40	50
Wydajność klonowania		35	43	31	21	25	23
FBS	Wielokrotne przejście	113	103	99	95	103	102
	Wydajność powlekania	59	58	57	74	32	42
	Skuteczność klonowania	49	56	42	47	28	30

Jak zamrażać i rozmrażać FBS i inną surowicę, aby zapewnić jej stabilność

Aby skutecznie zachować integralność surowicy zwierzęcej, należy ją przechowywać w stanie zamrożonym i chronić przed światłem. Zalecana temperatura przechowywania wynosi od -10 do -40 °C. W temperaturach poniżej -40 °C butelki do przechowywania mogą stać się kruche, zwiększając ryzyko pęknięcia.

Należy unikać wielokrotnych cykli rozmrażania/zamrażania, ponieważ przyspieszają one degradację składników odżywczych surowicy i mogą powodować tworzenie się nierozpuszczalnych osadów. Z tego powodu surowica nigdy nie powinna być przechowywana w zamrażarkach bezszronowych. Urządzenia te od czasu do czasu nagrzewają się, aby zapobiec wewnętrznemu osadzaniu się lodu, a zatem są szkodliwe dla klarowności i stabilności zamrożonych produktów surowicy.

Zalecana procedura rozmrażania FBS i innych surowic

• Wyjmij butelki z surowicą z zamrażarki i pozwól im aklimatyzować się do temperatury pokojowej przez około 10 minut.
• Umieść każdy pojemnik w łaźni wodnej o temperaturze od 30 do 37 °C lub w inkubatorze. Wyższe temperatury spowodują degradację termolabilnych składników odżywczych. Jeśli używasz łaźni wodnej, nie zanurzaj butelek powyżej poziomu zawartości surowicy, aby zapobiec zanurzeniu zakrętek butelek. Łaźnie wodne są częstym źródłem zanieczyszczenia pożywek i surowicy.
• Delikatnie obracaj lub potrząsaj butelkami co 10-15 minut, aż surowica zostanie całkowicie rozmrożona.

Unikaj krioprecypitatów podczas rozmrażania surowicy (FBS)

Metoda stosowana do rozmrażania surowicy ma kluczowe znaczenie dla jej optymalnej wydajności. Kluczem do prawidłowego rozmrażania jest okresowe mieszanie. Jeśli butelka surowicy nie jest regularnie wstrząsana lub wirowana podczas rozmrażania, we frakcji płynnej utworzą się gradienty soli i białek. W tych gradientach znajdują się wysokie stężenia soli, białek i lipidów, które mogą prowadzić do tworzenia się krystalicznych lub kłaczkowatych osadów. Te "krioprecypitaty" nie są toksyczne dla kultur komórkowych, ale wpływają na wygląd i spójny skład FBS lub innych surowic zwierzęcych.

Okazjonalne, rzadkie krioprecypitaty nie są rzadkością, nawet w surowicy, która jest rozmrażana przy użyciu zalecanej procedury.

Jeśli surowica jest rozmrażana nieprawidłowo, może powstać zwiększona ilość krioprecypitatu, który często jest nierozpuszczalny. Nie zaleca się filtrowania surowicy w celu usunięcia krioprecypitatu, ponieważ może to spowodować niezamierzoną utratę składników odżywczych, takich jak czynniki wzrostu, mitogeny i inne białka.

Chroń rozmrożone FBS i inne surowice poprzez bezpieczne chłodzenie i przechowywanie

Niezwłocznie użyj rozmrożonej surowicy. Płynne FBS i inne surowice mogą być przechowywane w lodówce (2 do 8 °C) do czterech tygodni. Aby uniknąć cykli rozmrażania/zamrażania lub wyrzucania niewykorzystanej surowicy po ponad czterech tygodniach chłodzenia, zaleca się natychmiastowe dozowanie niepotrzebnej surowicy do małych, odpowiednich do zastosowania porcji w sterylnych warunkach hodowlanych i ponowne zamrożenie w celu ochrony stabilności do wykorzystania w przyszłości.