Oznaczanie witaminy A i E metodą HPLC

Wprowadzenie

Postępowanie zgodnie z metodą GB dla witaminy A i witaminy E, jak napisano, z kolumną 250 x 4,6 mm Ascentis^® Express C30 zapewnia podstawową rozdzielczość między parą krytyczną (gamma- i beta-tokoferol; piki 3 i 4). Gdy używana jest kolumna 150 x 4,6 mm Ascentis^® Express C30, rozdzielczość podstawowa jest nadal zachowana, a separacja jest zakończona w czasie krótszym o połowę w porównaniu z oryginalną metodą. Ponadto szybkość przepływu można podwoić za pomocą kolumny Ascentis^® Express C30 o wymiarach 250 x 4,6 mm, co daje rozdzielanie trwające mniej niż dziesięć minut w porównaniu z oryginalną metodą. Ta aplikacja demonstruje, w jaki sposób konwersja metod na technologię cząstek powierzchniowo porowatych poprawia przepustowość.

Witamina A lub octan retinylu

Ogólna struktura tokoferolu

Tokoferol	R1	R2
Alfa (α)	CH₃	CH₃
Beta (β)	CH₃	H
Gamma (γ)	H	CH₃
Delta (δ)	H	H

Warunki eksperymentu
Kolumna	Ascentis® Express C30 (2.7µm) 250 x 4.6 mm
Detekcja	UV @ 294 nm (pół-mikrokomora przepływowa; 5 µL)
Iniekcja objętość	10 µL
Prędkość przepływu	0.8 mL/min
Temperatura	Kolumna: 20 °C Autosampler: otoczenia
Spadek ciśnienia	237 bar (3437 psi)
Faza ruchoma	.[A] = woda, [B] = metanol
Gradient	96% B do 13 min, 96 - 100% B w 7 min, utrzymywanie 100% B przez 4 min, 100 - 96% B w 0.5 min, utrzymywanie 96% B przez 5.5 min
Rozcieńczalnik	Metanol:Etanol:Heksan 6:3:1 (v/v)
Roztwór standardowy	20 µg/ml octanu retinylu, 400 µg/ml δ-tokoferolu, 100 µg/ml γ-tokoferolu, 1 mg/ml β-tokoferolu i 300 µg/ml α-tokoferolu w rozcieńczalniku

Warunki eksperymentu
Kolumna	Ascentis® Express C30 (2.7µm) 150 x 4.6 mm
Detekcja	UV @ 294 nm (pół-mikrokomora przepływowa; 5 µL)
Objętość iniekcji	10 µL
Prędkość przepływu	0.8 mL/min
Temperatura	Kolumna: 20 °C Autosampler: Otoczenie
Spadek ciśnienia	153 bar (2219 psi)
Faza ruchoma	.[A] = woda, [B] = metanol
Gradient	96% B do 13 min, 96 - 100% B w 7 min, utrzymywanie 100% B przez 4 min, 100 - 96% B w 0.5 min, utrzymywanie 96% B przez 5.5 min
Rozcieńczalnik	Metanol:Etanol:Heksan 6:3:1 (v/v)
Roztwór standardowy	20 µg/ml octanu retinylu, 400 µg/ml δ-tokoferolu, 100 µg/ml γ-tokoferolu, 1 mg/ml β-tokoferolu i 300 µg/ml α-tokoferolu w rozcieńczalniku

Warunki eksperymentu
Kolumna	Ascentis® Express C30 (2.7µm) 150 x 4.6 mm
Detekcja	UV @ 294 nm (pół-mikrokomora przepływowa; 5 µL)
Objętość iniekcji	10 µL
Prędkość przepływu	0.8 lub 1,6 ml/min
Temperatura	Kolumna: 20 °C Autosampler: otoczenie
Spadek ciśnienia	243 bar (3524 psi) @ 0.8 mL/min 479 bar (6946 psi) @ 1.6 mL/min
Faza ruchoma	[A] = woda, [B] = metanol
Gradient	96% B do 13 min, 96 - 100% B w 7 min, utrzymać 100% B przez 4 min, 100 - 96% B w 0.5 min, utrzymywanie 96% B przez 5.5 min
Rozcieńczalnik	Metanol:Etanol:Heksan 6:3:1 (v/v)
Roztwór standardowy	20 µg/ml octanu retinylu, 400 µg/ml δ-tokoferolu, 100 µg/ml γ-tokoferolu, 1 mg/ml β-tokoferolu i 300 µg/ml α-tokoferolu w rozcieńczalniku

Wnioski

W zależności od możliwości systemu, przepustowość separacji można zwiększyć poprzez zastosowanie kolumny o mniejszej długości lub podwojenie natężenia przepływu.

Related Materials

Kolumna Ascentis^® Express C30 250 x 4,6 mm, 2,7 µm jest dostępna jako produkt niestandardowy.