Metoda rozpuszczania kwasu foliowego USP

Tabletki z kwasem foliowym (USP)

Kwas foliowy lub folian jest klasyfikowany jako witamina z grupy B (B9).
Kwas foliowy jest wytwarzany syntetycznie i stosowany w żywności wzbogaconej i suplementach.
Folian jest przekształcany przez ludzi w dihydrofolian (kwas dihydrofoliowy), tetrahydrofolian (kwas tetrahydrofoliowy) i inne pochodne, które mają różne aktywności biologiczne.

Testy rozpuszczania leku zostały przeprowadzone zgodnie z warunkami eksperymentalnymi zawartymi w monografii USP37-NF32 dla tabletek kwasu foliowego (przy użyciu izokratycznej metody HPLC z kolumnami RP-18, a tym samym skalowalnymi). 

Przepisano kolumnę 250x4,6 mm z wypełnieniem L1 pracującą z prędkością 1,0 ml/min. Aby poprawić przepustowość próbki, przenieśliśmy tę metodę na kolumnę monolityczną o długości 100x4,6 mm.

Nowa metoda okazała się szybsza, miała lepszą rozdzielczość chromatograficzną, niższe ciśnienie wsteczne kolumny i nadal spełniała wszystkie kryteria wydajności metody w porównaniu z zalecaną kolumną.

Rozpuszczanie <711> HPLC

Test 1
Medium: Woda; 500 ml
Aparat 2: 50 obr/min
Czas: 45 min
Roztwór wzorcowy: Roztwór o znanym stężeniu USP Folic Acid RS, skorygowany o zawartość wody, w Medium
Roztwór próbki: Przefiltrowana porcja badanego roztworu, w razie potrzeby odpowiednio rozcieńczona Medium

Analiza
Próbki: Roztwór wzorcowy i roztwór próbki
Postępować zgodnie z instrukcjami testu, wprowadzając wszelkie niezbędne modyfikacje.
Obliczyć procent oznaczonej ilości rozpuszczonego kwasu foliowego (C₁₉H₁₉N₇O₆):
Wynik = (rU/rS) × (CS×D×V/L) × 100

rU = powierzchnia piku kwasu foliowego z roztworu próbki
rS = powierzchnia piku kwasu foliowego z roztworu wzorcowego
CS = stężenie kwasu foliowego USP RS w roztworze wzorcowym (mg/ml)
D = współczynnik rozcieńczenia dla roztworu próbki
V = objętość pożywki, 500 ml
L = oznaczenie na etykiecie (mg/tabletka)

Test
Faza ruchoma: Przenieść 35,1 g nadchloranu sodu i 1,40 g jednozasadowego fosforanu potasu do kolby pomiarowej o pojemności 1 l. Dodać 7,0 ml 1 N wodorotlenku potasu i 40 ml metanolu, rozcieńczyć wodą do pełnej objętości i wymieszać. Dostosować za pomocą 1 N wodorotlenku potasu lub kwasu fosforowego do pH 7,2.
Rozcieńczalnik: Roztwór wodny zawierający 2 mL wodorotlenku amonu i 1 g nadchloranu sodu na 100 mL
Roztwór odpowiedni dla systemu: 0,2 mg/ml każdego z USP Folic Acid RS i USP Folic Acid Related Compound A
RS w rozcieńczalniku. [Przed użyciem przepuścić przez filtr o wielkości porów 1 μm lub drobniejszy. Roztwór wzorcowy: 0,20 mg/ml kwasu foliowego USP RS, skorygowane o zawartość wody w rozcieńczalniku
Roztwór próbki: Równoważny 0,2 mg/ml kwasu foliowego, z NLT 20 sproszkowanych tabletek w rozcieńczalniku; delikatnie wstrząsnąć, aby wspomóc rozpuszczanie, i przefiltrować, odrzucając pierwszą porcję.
System chromatograficzny (patrz Chromatografia 621, Przydatność systemu.)
Detektor: UV 254 nm
Kolumna: 250x4,6 mm; pakowanie L1
Przepływ: 1 mL/min
Objętość iniekcji: 25 μL

Wymóg odpowiedniości systemu
Rozdzielczość NLT 3,6 między związkiem A związanym z kwasem foliowym a kwasem foliowym

Chromolith^® HighResolution RP-18 endcapped

Warunki chromatograficzne
Kolumna:	Chromolith® HighResolution RP18e 100x4.6 mm (1.52022.0001)
Wtrysk:	10 μL
Wykrywanie:	UV 254 nm
Komórka:	20 μL
Prędkość przepływu:	2.0 mL/min
Środek:	Woda; 500 mL
Aparatura:	USP Apparatus 2 (Paddle), 50 rpm
Czas:	45mins
Faza ruchoma:	Transfer 35.1 g nadchloranu sodu i 1,40 g jednozasadowego fosforanu potasu do kolby pomiarowej o pojemności 1,0 l. Dodać 7,0 ml 1 N wodorotlenku potasu i 40 ml metanolu, rozcieńczyć wodą do pełnej objętości i wymieszać. Dostosować za pomocą 1 N wodorotlenku potasu lub kwasu fosforowego do pH 7,2.
Temperatura:	otoczenia
Przygotowanie próbki:	10 ppm w rozcieńczalniku
Spadek ciśnienia:	130 Bar(1885 psi)

Dane chromatograficzne: Standard

No.	Związek	Czas retencji (min)	Współczynnik ogonowania
1	Kwas foliowy	3.2	1.2

Wynik (%) = (rU/rS) × (CSx D x V/L) ×V× 100

Area of Sample	Average area of Standard	CS (mg/mL)	Oświadczenie na etykiecie (mg/tabletka)	Współczynnik rozcieńczenia	V Objętość nośnika (mL)	Rozpuszczanie (%)
95753						77.92
95451						77.67.7
95553	122892	0.01	5	1	500	77.75
95620						77.81
95634						77.82
Średnia						77.8±0.1

Tolerancja: NLT 75% (Q) oznaczonej ilości kwasu foliowego ulega rozpuszczeniu.