Analiza LC/MS nukleotydów na 9989 ZIC-cHILIC
Materiały
Standardowe
CONDITIONS
column
SeQuant® ZIC-cHILIC, 10 cm x 2.1 mm, 3.0 μm particles (1.50657)
mobile phase
[A] acetonitrile; [B] 50 mM ammonium acetate, pH 5.0 with acetic acid in water
gradient
26 to 27% B in 10 min; to 27 to 35% B in 10 min; to 26% B in 0.1 min; hold at 26% B for 9.9 min
flow rate
0.3 mL/min
pressure
1029 psi (71 bar)
column temp.
50 °C
detector
Q-TOF (ESI-negative), XIC of the following m/z values: AMP-346, ADP-426, ATP-506, CMP-322, CDP-402, (CTP-482, GMP-362, GDP-442, GTP-522, UMP-323, UDP-403, UTP-483)
injection
10 μL
sample
10-30 μg/mL of nucleotides (AMP, ADP, ATP, CMP, CDP, CTP, GMP, GDP, GTP, UMP, UDP, UTP) (80/20 acetonitrile/50 mM ammonium acetate in water, pH 5.3 with acetic acid)
Opis
Komentarz do analizy
Nukleotydy są budulcem kwasów nukleinowych. Składają się z zasady azotowej, cukru i grupy fosforanowej, co czyni je wysoce polarnymi i jonowymi. Stanowi to wyzwanie dla typowej chromatografii w odwróconej fazie (RPC). Te naładowane polarne anality są słabo zatrzymywane przez RPC, a zatem zwykle chromatografowane za pomocą chromatografii jonowymiennej lub RPC w połączeniu z odczynnikiem parującym jony. Analiza nukleotydów przy użyciu odczynników do parowania jonów lub buforów fosforanowych o wysokim stężeniu powoduje wysokie tło i zanieczyszczenie źródła jonów do wykrywania MS. Separacja HILIC jest alternatywą, która umożliwia czułą detekcję MS bez użycia odczynników par jonowych.
Informacje prawne
SeQuant is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany