Chromatografia cienkowarstwowa

W metodzie TLC faza stacjonarna to cienka warstwa materiału adsorbującego, zwykle żelu krzemionkowego lub tlenku glinu, pokryta obojętną powierzchnią płytki, zwykle szklaną, plastikową lub aluminiową. Próbka jest nanoszona punktowo na jeden koniec płytki TLC i umieszczana pionowo w zamkniętej komorze z rozpuszczalnikiem organicznym (faza ruchoma). Faza ruchoma przemieszcza się w górę płytki dzięki siłom kapilarnym, a składniki próbki migrują na różne odległości w oparciu o ich zróżnicowane powinowactwo do fazy stacjonarnej i ruchomej. Gdy rozpuszczalnik osiągnie górną część płytki, płytka jest usuwana z komory wywoływania i suszona. Rozdzielone składniki pojawiają się jako plamki na płytce, a współczynnik retencji (Rf) każdego składnika jest oceniany.

TLC Process and Principles

TLC opiera się na klasycznej zasadzie chromatografii, w której składniki mieszaniny są rozdzielane między stałą fazą stacjonarną a ciekłą fazą ruchomą poprzez zróżnicowane powinowactwo między dwiema fazami. 

Współczynnik retencji TLC (R_f)

Współczynnik retencji (R_f) służy do pomiaru ruchu związków wzdłuż płytki TLC. R_f definiuje się jako odległość przebytą przez pojedynczy składnik podzieloną przez całkowitą odległość przebytą przez rozpuszczalnik. Jego wartość zawsze wynosi od zera do jednego.

Ogólnie rzecz biorąc, im silniej związek wiąże się z adsorbentem fazy stacjonarnej, tym wolniej migruje w górę płytki TLC. Ponieważ adsorbenty TLC są zazwyczaj polarne, związki niepolarne mają tendencję do szybszego przemieszczania się w górę płytki, co skutkuje wyższymi wartościami R_f, podczas gdy związki polarne mają tendencję do powolnego przemieszczania się i mają niższe wartości R_f.

Zastosowania TLC

TLC jest szeroko stosowana w wielu branżach i dziedzinach badań, w tym w farmacji, testach klinicznych, toksykologii środowiskowej, analizie żywności, wody i pestycydów oraz kosmetykach. Typowe zastosowania TLC obejmują:

• Analiza pozostałości leków i antybiotyków w żywności i próbkach środowiskowych
• Identyfikacja i kwantyfikacja barwników, składników, konserwantów i środków słodzących w produktach spożywczych i kosmetycznych
• Kontrola jakości i badanie czystości preparatów farmaceutycznych
• Szybkie, wysokowydajne badania przesiewowe przed HPLC
• Badanie reakcji chemicznych pod kątem ich zakończenia