Analiza LC/MS aflatoksyny M1 w mleku w 2445 Express HILIC po SPE z użyciem 5225 Tox AflaZea, kwantyfikacja stężeń pikogramowych
Materiały
Standardowe
kolumna analityczna
probówka lub płytka SPE
produkt powiązany
Syringe PP/PE without needle
luer slip tip, centered, capacity 1 mL, graduated, 0.01 mL, non-sterileCONDITIONS
sample preparation
SPE (Solid Phase Extraction)
sample/matrix
cow milk
SPE tube/cartridge
Supel™ Tox AlflaZea, 6 mL (55314-U)
extraction process
centrifuge 45 g liquid milk for 60 min at 5000 rpm (RCF 4863 xg), cool at 0 °C for 30 minutes, remove fat layer, transfer middle layer to collection flask,
sample addition
10 mL, 2 drop/second using vacuum
washing
2 x 2 mL acetonitrile (collect with sample)
eluate post-treatment
evaporate to dryness at 70 °C using nitrogen
sample preparation
reconstitut in 500 μL 20:80 acetonitrile:water, filter into 750 μL poly vial using PVDF filter, 0.2 μm
column
Ascentis Express C18, 50 cm x 2.1 mm I.D., 2.7 μm particles (53822-U)
mobile phase
[A] 0.1% (v/v) formic acid; [B] acetonitrile
gradient
90% A for 0.5 min; to 10% A in 0.5 min; held at 10% for 3 min; to 90% A in 0.10 min; held at 90% A for 3 min
flow rate
0.4 mL/min
column temp.
ambient
detector
MS/MS (MRM transitions)
injection
10 μL
Opis
Komentarz do analizy
Wstępna obróbka próbki: odwirować 45 g płynnego mleka przez 60 minut przy 5000 obr/min (RCF 4863 xg), schłodzić w temperaturze 0°C przez 30 minut, usunąć warstwę tłuszczową, przenieść warstwę środkową do kolby zbiorczej, dodać 20 ml acetonitrylu do 50 ml probówki wirówkowej, dodać 20 ml próbki do acetonitrylu, dodać zawartość 1 probówki niebuforowanej Supel Q, natychmiast rozproszyć sól, szybko umieścić na wytrząsarce na 5 minut, odwirować przy 5000 obr/min przez 20 minut, usunąć górną warstwę (roztwór obciążający).
Aflatoksyna M1 jest metabolitem aflatoksyny B1 i można ją znaleźć w produktach mlecznych, gdy zwierzęta były karmione paszami zawierającymi alatoksyny. Aflatoksyny są pozytywnie powiązane z rakiem wątrobowokomórkowym. Aflatotoksyna M1 została wykryta w mleku i oznaczona ilościowo w stężeniu 25 pg/ml. Przygotowanie próbki obejmowało wytrącenie białka z rozdziałem rozpuszczalnika i oczyszczenie próbki przy użyciu probówek Supel Tox AflaZea SPE. Analizę przeprowadzono za pomocą LC-MS przy użyciu kolumny HPLC Ascentis Express C18, 5 cm x 2,1 mm I.D., 2,7 μm do separacji. Wykrywanie i kwantyfikacja aflatoksyny M1 na poziomie 25 pg/mL spełnia obecne wymogi regulacyjne dotyczące aflatoksyny M1 dla uczestników traktatu UE, zgodnie z WE 1881/2006.
Informacje prawne
Ascentis is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Supel is a trademark of Sigma-Aldrich Co. LLC