Pochodzenie linii komórkowej
Szczurzy guz chromochłonny nadnerczy
Opis linii komórkowej
Pochodzi z przeszczepialnego guza chromochłonnego nadnerczy szczura. Reagują odwracalnie na czynnik wzrostu nerwów poprzez indukcję fenotypu neuronalnego. Komórki syntetyzują i przechowują katecholaminę, dopaminę i NPP. Wykorzystywane w badaniach neurobiologicznych i neurochemicznych. Gdy komórki są hodowane z kolagenem - fibroblasty neuronalne; bez kolagenu - kuliste skupiska. UWAGA: Rosnące zamówienia PC-12 wysyłane z ECACC są hodowane bez kolagenu, a zatem komórki będą w zawiesinie po otrzymaniu.
Zastosowanie
Badania neurobiologiczne i neurochemiczne
Linia komórkowa PC-12 od szczura została wykorzystana do stworzenia sztucznych modeli tkanek układu nerwowego do badania neurodegeneracji. Została również wykorzystana do przeprowadzenia testu kontaktu z komórkami w celu przetestowania biokompatybilności macierzy elektrod o dużej gęstości.
pożywka hodowlana
RPMI 1640 + 2mM Glutamina + 10% Surowica końska + 5% Płodowa surowica bydlęca (FBS)
Rutyna subkultury
Komórki rosną w małych skupiskach, ale słabo przylegają do plastiku. Komórki rosną zadowalająco w zawiesinie w nieleczonych kolbach. Hodowle należy utrzymywać na poziomie 2-5x100 000 komórek/ml: 5%CO2; 37°C. W celu przyłączenia hodować w kolbach pokrytych kolagenem (musi to być kolagen typu IV), karmić 3 razy w tygodniu i dzielić hodowle w stosunku od 1:3 do 1:6 (tj. wysiew 2-4 x 10 000 komórek/cm2) przy użyciu 0,25% trypsyny/EDTA; 5%CO2; 37°C. Hodowle będą dostarczane w postaci zawiesiny. Po otrzymaniu należy inkubować kolbę przez noc bez otwierania, a po wprowadzeniu do kolby pokrytej kolagenem typu IV komórki powinny się przyczepić. Przygotowanie roztworu kolagenu: Użyj kolagenu typu IV (Sigma C5533). Dodaj 5 mg kolagenu do 50 ml 0,1 M lodowatego kwasu octowego, aby uzyskać 0,01% roztwór kolagenu. Mieszać w temperaturze pokojowej przez 1-3 godziny. Sterylizować, przenosząc roztwór do zakręcanej szklanej butelki i ostrożnie dodając porcję chloroformu, który utworzy warstwę pod roztworem kolagenu. Objętość chloroformu powinna wynosić około 10% objętości kolagenu. Po całonocnej inkubacji w temperaturze 4oC aseptycznie usunąć górną warstwę kolagenu i przechowywać w sterylnych probówkach lub kolbach w temperaturze 4oC. Uwaga: Można również użyć matrigelu o obniżonej zawartości czynnika wzrostu. Przygotowanie kolb: Dodać kolagen w ilości wystarczającej do pokrycia powierzchni wymaganej liczby kolb do hodowli tkankowych i pozostawić na co najmniej 6 godzin w temperaturze 37°C. Usunąć nadmiar płynu i pozostawić kolby do wyschnięcia przez inkubację w temperaturze 37°C, pozostawiając luźne korki. Przed dodaniem komórek przepłukać kolbę trzykrotnie w PBS. Kolby można nabyć od dostawców wstępnie pokryte kolagenem typu IV. Zgłoszony czas podwojenia = 92 godziny
Inne uwagi
W przypadku przesyłek w regionie Azji i Pacyfiku mogą obowiązywać dodatkowe opłaty za transport i obsługę. Więcej informacji można uzyskać u lokalnego przedstawiciela działu obsługi klienta.
Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.