ECM340

Ludzki sVCAM-1 ELISA

• Synonim(y): CD106
• Kod UNSPSC: 41116158
• NACRES: NA.84

Właściwości

• producent / nazwa handlowa: Chemicon^®
• metody: ELISA: suitable
• numer dostępu UniProt: P19320
• informacje o genach: human ... VCAM1/INCAM-100/MGC99561/CD106/DKFZp779G(7412) , VCAM1/INCAM-100/MGC99561/CD106/DKFZp779G2333/L1CAM(7412)

Opis

Opis ogólny

Vascular cell adhesion molecule-1 (VCAM-1, CD106) is a member of the immunoglobulin gene superfamily. Two forms of VCAM-1 with six or seven extracellular Ig-like domains arise due to alternative splicing from a seven-domain VCAM-1 (7D VCAM-1). 7D VCAM-1 is the dominant form expressed by cultured human endothelial cells [Cybulsky et al., 1991; Hession et al., 1991]. Homology of domains 1 through 3 with domains 4 through 6 suggests a gene duplication event [Cybulsky et al., 1991; Hession et al., 1991]. The cDNA of 7D VCAM-1 predicts a core protein of approximately 81 kDa with seven sites for N-linked glycosylation. Upon complete glycosylation the mature protein has a molecular weight of approximately 102 kDa. This observation is in general agreement with the 110 kDa protein immunoprecipitated from cytokine-activated endothelium [Carlos et al., 1990; Rice et al., 1990].

VCAM-1 appears to have been highly conserved through evolution. Both rat and mouse VCAM-1 are highly homologous at the protein level to the human VCAM-1 (77% and 76%, respectively) [Hession et al., 1992].

VCAM-1 supports the adhesion of lymphocytes, monocytes, natural killer cells, eosinophils and basophils, through its interaction with integrin a4b1 (VLA-4). VCAM-1/VLA-4 interaction mediates firm adherence of circulating non-neutrophilic leukocytes to endothelium [Sharar et al., 1995]. VCAM-1 also participates in leukocyte adhesion outside of the vasculature, mediating precursor lymphocyte adhesion to bone marrow stromal cells [Ryan et al. 1991] and B cell binding to lymph node follicular dendritic cells [Feedman et al., 1992]. VCAM-1 is not constitutively expressed on endothelium, but can be up-regulated in vitro in response to LPS, TNF-a, and IL-1 [Carlos & Harlan, 1990; Osborn et al., 1989], as well as to interferon-g and IL-4 [Masinovsky et al. 1990]. VCAM-1 is also present on tissue macrophages, dendrite cells, bone marrow fibroblasts, myoblasts and myotubes.

A soluble form of VCAM-1 has been described [De Maeyer & De Maeyer-Buignard, 1995; Lobb et al., 1991], and soluble VCAM-1 has been found in serum [Gearing et al., 1995]. Increased levels of soluble VCAM-1 can be detected in several disease states, including cancer [Banks et al., 1993; Fortis et al., 1995; Gearing & Newman, 1993; Lai et al., 1995], autoimmune disorders [Gearing & Newman, 1993; Doreduffy et al., 1995; Gruschwitz et al., 1995; Mason et al., 1993; Mrowka & Sieberth, 1995; Spronk et al., 1994; Wellicome et al., 1993], infections [Jakobsen et al., 1994] and inflammations [Gearing & Newman, 1993; Mrowka & Sieberth, 1995; Adams et al., 1995; Lim et al., 1995].

Test Principle:

An anti-VCAM-1 monoclonal antibody is adsorbed onto microwells.

Soluble VCAM-1 present in a sample or standard then binds to antibodies adsorbed to the microwells. A mixture of biotin-conjugated monoclonal anti-VCAM-1 antibody and Streptavidin-HRP conjugate is added. Biotinylated anti-VCAM-1 antibody binds to VCAM-1 captured by the first antibody.

Streptavidin-HRP binds to the biotinylated anti-VCAM-1. Unbound biotinylated anti-VCAM-1 and Streptavidin-HRP conjugate is removed with a wash step and HRP substrate solution is added to the wells.

The pair of monoclonal antibodies used in this ELISA detect the soluble form of VCAM-1 present in serum, plasma, urine, and other biological fluids.

An amount of colored product is formed, proportional to the amount of soluble VCAM-1 present in the sample. The reaction is terminated by addition of acid and absorbance is measured at 450 nm. A standard curve is prepared from six soluble VCAM-1 standard dilutions and the VCAM-1 sample concentration is determined.

Specyficzność

Dostępne anality: sVCAM-1

Metody wykrywania: Chromogeniczne

Zastosowanie

Ten ludzki test ELISA sVCAM-1 jest używany do pomiaru i ilościowego oznaczania poziomów sVCAM-1 w badaniach nad stanem zapalnym, immunologią i neuronauką.

Cechy i korzyści

• Pipety z podziałką 5 mL i 10 mL
• Regulowane mikropipety jednokanałowe o pojemności od 5 μL do 1000 μL z jednorazowymi końcówkami
• Regulowane mikropipety wielokanałowe o pojemności od 50 μL do 300 μL z jednorazowymi końcówkami
• Zbiornik mikropipety wielokanałowej - Zlewki, kolby, cylindry niezbędne do przygotowania odczynników
• Urządzenie do dostarczania roztworu płuczącego (wielokanałowa butelka płucząca lub automatyczny system płuczący)
• Czytnik pasków mikrodołkowych zdolny do odczytu przy długości fali 450 nm (620 nm jako opcjonalna referencyjna długość fali)
• Kalkulator statystyczny z programem do przeprowadzania analizy regresji liniowej.

Komponenty

• 2 aluminum pouches with 3 Microwell Strips (16 wells per strip) coated with Monoclonal Antibody (murine) to human VCAM-1
• 1 vial (0.1 mL) Conjugate Mixture containing Biotin-Conjugated Anti-VCAM-1 Monoclonal (murine) Antibody mixed with Streptavidin-HRP*
• 2 vials (200 ng/mL as reconstituted) soluble VCAM-1 Standard, lyophilized*
• 1 vial lyophilized control serum· 1 bottle (50 mL) Wash Buffer Concentrate 20X (PBS with 1% Tween 20)*
• 1 vial (5 mL) Assay Buffer Concentrate 20X (PBS with 1% Tween 20 and 10% BSA)*
• 1 vial (7 mL) Substrate Solution I (tetramethyl-benzidine)
• 1 vial (7 mL) Substrate Solution II (0.02 % buffered hydrogen peroxide)
• 1 vial (12 mL) Stop Solution (1M Phosphoric Acid, H3PO4), ready to use
• 1 Microwell Strip Holder· 2 Adhesive Plate Covers
• Reagents containing 0.01% thimerosal as preservative

Przechowywanie i stabilność

Środki ostrożności:

• Odczynniki są przeznaczone wyłącznie do użytku badawczego i nie są przeznaczone do stosowania w procedurach diagnostycznych lub terapeutycznych.
• Nie mieszać ani nie zastępować odczynników odczynnikami pochodzącymi z innych partii lub innych źródeł.
• Nie należy używać odczynników zestawu po upływie daty ważności podanej na etykiecie.
• Nie wystawiać odczynników zestawu na działanie silnego światła podczas przechowywania lub inkubacji.
• Podczas pracy z odczynnikami lub próbkami należy nosić gumowe lub lateksowe rękawiczki jednorazowego użytku.
• Niektóre odczynniki zawierają tiomersal jako środek konserwujący, który jest wysoce toksyczny w przypadku wdychania, połknięcia lub kontaktu ze skórą. Tiomersal jest potencjalnym mutagenem i należy się z nim odpowiednio obchodzić.
• Należy unikać kontaktu roztworów substratów z utleniaczami i metalami.
• Aby uniknąć zanieczyszczenia mikrobiologicznego lub zanieczyszczenia krzyżowego odczynników lub próbek, które mogą unieważnić test, należy używać jednorazowych końcówek pipet i/lub pipet.
• Do dozowania odczynników koniugatu i substratu należy używać czystych, dedykowanych tacek na odczynniki.
• Ekspozycja na kwasy spowoduje inaktywację koniugatu.
• Do przygotowania odczynników należy używać wody destylowanej lub dejonizowanej.
• Przed użyciem roztwory substratów muszą mieć temperaturę pokojową.
• Ponieważ dokładne warunki mogą się różnić w zależności od testu, dla każdego przebiegu należy ustalić krzywą standardową.
• Zanieczyszczenie bakteryjne lub grzybicze próbek przesiewowych lub odczynników lub zanieczyszczenie krzyżowe między odczynnikami może powodować błędne wyniki.
• Preferowane są jednorazowe końcówki pipet, kolby lub naczynia szklane. Przed użyciem szklane naczynia wielokrotnego użytku należy umyć i dokładnie wypłukać ze wszystkich detergentów.
• Nieprawidłowe lub niewystarczające płukanie na dowolnym etapie procedury spowoduje uzyskanie wyników fałszywie dodatnich lub fałszywie ujemnych. Całkowicie opróżnij studzienki przed dozowaniem świeżego buforu do płukania, napełnij buforem do płukania zgodnie ze wskazaniami dla każdego cyklu płukania i nie pozwól, aby studzienki pozostawały odkryte lub suche przez dłuższy czas.
• Wszelkie obecne ludzkie przeciwciała anty-mysie IgG (HAMA) mogą zakłócać testy wykorzystujące mysie przeciwciała monoklonalne, prowadząc zarówno do wyników fałszywie dodatnich, jak i fałszywie ujemnych. Interferencję HAMA można zmniejszyć poprzez dodanie mysich immunoglobulin (surowicy, płynu puchlinowego lub przeciwciał monoklonalnych o nieistotnej swoistości) do rozcieńczalnika próbki.

Informacje prawne

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Oświadczenie o zrzeczeniu się odpowiedzialności

O ile nie określono inaczej w naszym katalogu lub innej dokumentacji firmy dołączonej do produktu(-ów), nasze produkty są przeznaczone wyłącznie do użytku badawczego i nie mogą być wykorzystywane do żadnych innych celów, w tym między innymi do nieautoryzowanych zastosowań komercyjnych, zastosowań diagnostycznych in vitro, zastosowań terapeutycznych ex vivo lub in vivo lub jakiegokolwiek rodzaju konsumpcji lub zastosowania u ludzi lub zwierząt.

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.