17-10493

ChIPAb+ Trimethyl-Histone H3 (Lys36) - przeciwciało i zestaw primerów zweryfikowane pod kątem ChIP

from rabbit

• Synonim(y): H3K36me2, histon H3 (dimetyl K36), rodzina histonów H3, członek T, histon 3, H3, klaster histonów 3, H3
• Kod UNSPSC: 12352203
• eCl@ss: 32160702
• NACRES: NA.32

Właściwości

• pochodzenie biologiczne: rabbit
• Poziom jakości: 100
• klon: polyclonal
• reaktywność gatunkowa: human, mouse
• producent / nazwa handlowa: ChIPAb+; Upstate^®
• metody: ChIP: suitable (ChIP-seq); dot blot: suitable; immunoprecipitation (IP): suitable; western blot: suitable
• numer dostępu NCBI: NP_003484
• numer dostępu UniProt: Q16695
• Warunki transportu: dry ice

Opis

Opis ogólny

Histony są wysoce konserwatywnymi białkami, które służą jako rusztowanie strukturalne dla organizacji jądrowego DNA w chromatynę. Cztery podstawowe histony, H2A, H2B, H3 i H4, łączą się w oktamer (po 2 cząsteczki każdego z nich). Następnie 146 par zasad DNA owija się wokół oktameru, tworząc nukleosom, podstawową podjednostkę chromatyny. Histony są modyfikowane potranslacyjnie przez działanie enzymów zarówno w jądrze, jak i cytoplazmie. Modyfikacje te regulują transkrypcję, naprawę, rekombinację i replikację DNA. Najczęściej badanymi modyfikacjami są acetylacja, fosforylacja, metylacja i ubikwitynacja. Modyfikacje te mogą zmieniać lokalną architekturę chromatyny lub rekrutować czynniki trans-działające, które rozpoznają określone modyfikacje histonów (hipoteza "kodu histonowego"). Modyfikacje występują głównie na N-końcowych i C-końcowych ogonach, które rozciągają się poza cząsteczkę rdzenia nukleosomu. Metylacja histonu H3 na Lys36 (H3K36me2/3) jest ściśle związana z aktywnie transkrybowanymi genami, a modyfikacja ta występuje głównie w regionie kodującym, co sugeruje, że metylacja H3K36 jest niezbędna do wydajnej elongacji i procesywności polimerazy RNA II.

Wszystkie przeciwciała ChIPAb+ są indywidualnie walidowane pod kątem wytrącania chromatyny, w każdej partii, za każdym razem. Każdy zestaw przeciwciał ChIPAb+ zawiera startery kontrolne (testowane co partię za pomocą qPCR) w celu biologicznej walidacji wyników IP w kontekście specyficznym dla locus. Protokół qPCR i sekwencje starterów są dostarczane, umożliwiając badaczom walidację protokołów ChIP przy użyciu naszego przeciwciała w kontekście chromatyny. Każdy zestaw zawiera również ujemne przeciwciało kontrolne, aby zapewnić specyficzność reakcji ChIP.
Zestaw ChIPAb+ Trimethyl-Histone H3 (Lys36) zawiera przeciwciało Trimethyl-Histone H3 (Lys36), przeciwciało kontroli ujemnej (normalne królicze IgG) oraz startery qPCR, które amplifikują region 147 bp ludzkiego intronu BDNF. Przeciwciała Trimethyl-Histone H3 (Lys36) i przeciwciała kontroli ujemnej są dostarczane w skalowalnym rozmiarze reakcji "per ChIP" i mogą być stosowane do funkcjonalnej walidacji wytrącania chromatyny związanej z Trimethyl-Histone H3 (Lys36).

Specyficzność

Oczekuje się szerokiej reaktywności z innymi gatunkami.

Rozpoznaje trimetylo-histonę H3 (Lys36) o masie cząsteczkowej ~17 kDa.

Immunogen

Epitop: Trimetylowana Lys36

Liniowy peptyd odpowiadający ludzkiemu
Histon H3 trimetylowany w Lys36 z sekwencją peptydową APATGGV(K)KPHRYRPGC

Zastosowanie

Immunoprecypitacja chromatyny:
Sonikowaną chromatynę przygotowaną z komórek HeLa (1 X¹⁰⁶ równoważników komórek na IP) poddano immunoprecypitacji chromatyny przy użyciu 2 µg normalnej króliczej IgG lub 2 µl anty-trimetylo-histonu H3 (Lys36) i zestawu Magna ChIP A (nr kat. 17-610). Pomyślną immunoprecypitację fragmentów DNA związanych z trimetylo-histonem H3 (Lys36) zweryfikowano za pomocą qPCR przy użyciu starterów ChIP, BDNF Intron jako locus pozytywnego i starterów promotora GAPDH jako locus negatywnego (patrz rysunki). Dane przedstawiono jako procentowy wkład każdej próbki IP w stosunku do chromatyny wejściowej dla każdego amplikonu i próbki ChIP, jak wskazano. Szczegółowe informacje eksperymentalne można znaleźć w protokole EZ-Magna ChIP A (nr kat. 17-408) lub EZ-ChIP (nr kat. 17-371).

Analiza Western Blot i inhibicja peptydowa:
Reprezentatywne dane partii.
Rekombinowany histon H3 (nr kat. 14-411, pas 1) i histony rdzenia kurczaka (nr kat. 13-107, pas 2) zostały rozdzielone za pomocą elektroforezy, przeniesione na nitrocelulozę i wysondowane anty-trimetylo-histonem H3 (Lys36) (rozcieńczenie 1:1000) lub anty-trimetylo-histonem H3 (Lys36) wstępnie adsorbowanym 1mM peptydami histonu H3 zawierającymi następujące modyfikacje:
Lane 3: monometylo-lizyna 36
Pas 4: dimetylo-lizyna 36
Pas 5: trimetylo-lizyna 36
Pas 6: niezmodyfikowany
Białka wizualizowano przy użyciu koziego przeciwciała drugorzędowego przeciw królikowi sprzężonego z HRP i systemu detekcji chemiluminescencji. (Patrz rysunki).

Analiza specyficzności Dot Blot:
Reprezentatywne dane partii.
Peptydy histonowe z różnymi modyfikacjami (patrz tabela) przeniesiono na membranę PVDF i sondowano przeciwciałem Anti-trimethyl Histone H3 (Lys36) (rozcieńczenie 1:500). Białka wizualizowano przy użyciu przeciwciała wtórnego Donkey Anti-Rabbit IgG sprzężonego z HRP i systemu detekcji chemiluminescencji. (Patrz rysunki).

Zestaw ChIPAb+ Trimethyl-Histone H3 (Lys36) -ChIP Validated Antibody & Primer Set zawiera przeciwciało i specyficzne kontrolne startery PCR.

Research Category
Epigenetics & Nuclear Function

Research Sub Category
Histones

Opakowanie

25 testów w zestawie. Zalecane użycie: 0,1 μg przeciwciała na immunoprecypitację chromatyny (w zależności od kontekstu biologicznego).

Jakość

Chromatin Immunoprecipitation:
Sonicated chromatin prepared from HeLa cells (1e5 cell equivalents per IP) were subjected to chromatin immunoprecipitation using 0.1 µg of either Normal Rabbit IgG (Part No. CS200581), or 0.1 µg Anti-Trimethyl-Histone H3 (Lys36) (Part No.CS207341) and the Magna ChIP^® HiSens Kit (Cat. # 17-10460). Successful immunoprecipitation of trimethyl-Histone H3 (Lys36) associated DNA fragments was verified by qPCR using ChIP Primers, GAPDH coding D2 (Part No. CS207323).
Please refer to the Magna ChIP HiSens (Cat. # 17-10460) or EZ-Magna ChIP HiSens (Cat. # 17-10461) protocol for experimental details.

Opis wartości docelowych

~17 kDa

Postać fizyczna

Anty-Trimethyl Histone H3 (Lys36) (króliczy poliklonalny), nr kat. CS207341. Jedna fiolka zawierająca 50 µl (0,05 mg/ml) oczyszczonego poliklonalnego królika w buforze zawierającym 0,1 M Tris-Glicyny (pH 7,4), 150 mM NaCl i 0,05% azydku sodu, przed dodaniem 30% glicerolu. Przechowywać w temperaturze -20°C.

Normalne królicze IgG, nr części CS200581. Jedna fiolka zawierająca 7,5 µg króliczych IgG w 75 µl buforu do przechowywania zawierającego 0,05% azydku sodu. Przechowywać w temperaturze -20°C.

Primery ChIP, kodujące GAPDH D2. Nr części CS207323. Jedna fiolka zawierająca 75 μL po 5 μM każdego primera specyficznego dla ludzkiego regionu kodującego GAPDH (chr12:6647453+6647539 hg19 build). Przechowywać w temperaturze -20°C.
FOR: 5' GCC ATG TAG ACC CCT TGA AGA G 3'
REV: 5' ACT GGT TGA GCA CAG GGT ACT TTA T 3'

Format: Oczyszczony

Przechowywanie i stabilność

Przechowywać przez 1 rok w temperaturze -20°C od daty otrzymania. Zalecenia dotyczące postępowania: Po pierwszym rozmrożeniu, a przed zdjęciem korka, odwirować fiolkę i delikatnie wymieszać roztwór. Rozdzielić do probówek mikrowirówkowych i przechowywać w temperaturze -20°C. Unikać powtarzających się cykli zamrażania/rozmrażania, które mogą uszkodzić IgG i wpłynąć na działanie produktu.

Komentarz do analizy

Kontrola
Zawiera królicze przeciwciało IgG kontroli ujemnej i startery specyficzne dla ludzkiego BDNF Intron.

Informacje prawne

MAGNA CHIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Oświadczenie o zrzeczeniu się odpowiedzialności

Unless otherwise stated in our catalog or other company documentation accompanying the product(s), our products are intended for research use only and are not to be used for any other purpose, which includes but is not limited to, unauthorized commercial uses, in vitro diagnostic uses, ex vivo or in vivo therapeutic uses or any type of consumption or application to humans or animals.

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.

Informacja o środkach bezpieczeństwa

• Kod klasy składowania: 10 - Combustible liquids