분자 클로닝 및 단백질 발현
분자 클로닝의 목표는 클로닝, 클론 선택 및 단백질 발현을 돕는 다양한 요소를 포함하는 원형 DNA인 플라스미드 벡터에 관심 있는 유전자(GOI)를 삽입하는 것입니다. 연구자들은 종종 DNA 제한효소와 리게이즈를 사용하여 GOI를 발현 벡터 내에 적절하게 삽입하여 이후 단백질 발현을 위해 사용합니다. 이후 벡터를 GOI가 코드화하는 단백질을 발현할 세포에 삽입하거나 무세포 단백질 합성 시스템을 활용하여 단백질 발현을 달성합니다.
단백질이 발현된 후, 세포 신호전달, 형태학 또는 세포 내부의 다른 관점에 영향을 주는 것에 따라서 해당 단백질 기능을 연구합니다. 또는, 해당 단백질은 여러 다운스트림 애플리케이션에서 대용량으로 발현되어, 정제되고 사용될 수 있습니다. 추가적인 정보를 위해, 곤충, 박테리아, 포유류 단백질 발현 시스템을 위한 클로닝 및 발현 워크플로 전반에서 이용 가능한 신뢰할 수 있는 시약과 리소스의 종합적인 자사 제품을 탐색해 보십시오.
제한 효소 및 DNA 변형 효소
분자 클로닝에서, 연구자들은 종종 두 가지 일반적인 종류의 효소를 사용합니다 - DNA를 절단하는 제한효소와 핵산 변형을 수행하는 변형 효소로, 종종 리게이션(ligation) 단계 이전에 사용됩니다. 알칼리성 포스파타아제, 프로테아제, T7 RNA 중합효소, Ribonuclease A 및 T4 DNA 리가아제와 같은 다양한 제한 효소 및 기타 변형 효소를 탐색하여 귀하의 모든 연구 필요성을 충족하십시오.
CMV 프로모터 및 FLAG® 태그 기술을 사용한 무세포 발현 시스템 및 발현 벡터
자사의 클로닝 및 발현 포트폴리오는 간소화된 프로토콜 및 클로닝 키트와 함께 다양한 벡터 컬렉션을 제공하여 유전 공학을 보다 저렴하고 효율적으로 만듭니다. 차세대 무세포 단백질 발현 키트(Next Generation Cell-Free Protein Expression Kit(맥아) (제품 번호 CFPS700) 및 ALiCE® 키트(카탈로그 번호 AL0103000)와 같은 무세포 단백질 합성 또는 발현 시스템을 포함하는 광범위한 클로닝 및 발현 시스템을 선택하십시오. 또한, 일시적 또는 안정적 트랜스펙션 시스템에서 주변세포질 또는 세포질 발현을 위한 박테리아 및 포유동물 FLAG® 발현 벡터를 발견하여 필요한 경우 융합 태그를 제거하기 위한 엔테로키나아제(Ek) 절단 부위를 사용하여 N- 또는 C-말단에서 FLAG® 또는 3X FLAG® 서열을 자신 있게 발현하십시오.
Novagen® pET 시스템, SnapFast™ 벡터, Simplicon™ 벡터 및 UCOE™ 단백질 발현 시스템
모든 E. coli 발현 벡터와 곤충 발현 벡터는 양성 변형체의 쉬운 선택을 위해 앰피실린 저항성을 제공합니다. 박테리아 발현에서 재조합 단백질의 클로닝 및 발현을 위한 최상의 표준인 Novagen® pET System에 대해 알아보십시오. Oxford Genetics에서 개발한 SnapFast™ 벡터 제품군은 SnapFast™ 절단 부위를 사용하여 한 벡터에서 다른 벡터로 GOI를 전달할 수 있는 신속하고 용이한 프로토콜을 제공하므로 곤충, 효모, 박테리아 및 포유류 발현 시스템과 호환되는 벡터를 생성합니다. 자사의 Ubiquitous Chromatin Opening Element(UCOE™) 발현 벡터 기술을 이용하면, 안정적으로 트랜스펙션된 포유류 세포에서 30일 이내에 수 그램의 단백질을 획득할 수 있습니다. UCOE™ 발현 기술은 이식유전자 침묵(sliencing)을 방지하고 염색체 통합 부위에 상관없이 기존 벡터보다 최대 20배 높은 일관성 있고, 안정적이며 높은 수준의 유전자 발현을 제공합니다. The Simplicon™ In Vivo Protein Expression System은 비유전체 통합, 조절 가능하며 합성된 자가복제 RNA 기반의 발현 시스템으로, 유전체 통합 위험 없이 다수의 유전자를 전사된 인간 세포에 즉각적이고 지속적으로 단백질 발현을 생성합니다. 추가 정보를 위해, 자사의 Simplicon™ technology utilized for efficient human iPSCs generation video를 시청하십시오.
박테리아 및 효모 형질전환 시약 및 리소스
박테리아 형질전환은 열 충격 및 전기천공법과 같은 방법을 사용하여 외래 DNA를 박테리아에 삽입하는 과정입니다. 자사의 수용성 세포 포트폴리오는 가장 까다로운 재조합 단백질을 위해 최적의 단백질을 발현하도록 설계되었습니다. Competent Cell Selection Guide는 다양한 새로운 박테리아 유능 세포를 선택하여 단백질 발현, 루틴 또는 어려운 클로닝, 그리고 라이브러리 생성과 같은 다양한 응용 분야에 대비하는데 도움이 될 수 있습니다. 또한, Saccharomyces cerevisiae에서의 재조합 단백질 발현은 간단한 프로토콜, 기본 시약의 사용 및 확장성과 같은 많은 이점을 가지고 있습니다. 단백질 발현 워크플로의 일부로 효모 형질전환에 사용할 수 있는 여러 제품을 살펴보십시오. 트렌스펙션 효율 및 플라스미드 보존에 최적화된 NovaBlue® 수용성 세포는 우수한 라이브러리 제조 및 플라스미드 안정성을 지원합니다. 또한 Novagen® 수용성 세포는 적절한 단백질 접힘, 용해도 증가 또는 세포독성 단백질의 발현을 촉진하도록 설계되었습니다. 가장 인기 있는 브랜드는 Rosetta™, Origami™ 그리고 Overnight Express™ 시스템입니다.
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