qPCR
정량 실시간 PCR(qPCR)은 증폭된 생산물의 정량이 가능하도록 형광 보고자 분자를 사용합니다. 기존 PCR과 동일하게, DNA, cDNA 또는 RNA 주형이 증폭되지만, 각 주기에서 상대적인 또는 절대적인 정량화를 위해 형광 신호를 모니터합니다. 이 기술은 유전자 발현 분석, 유전자형분석, microRNA 분석, 유전적 변이성 분석 및 단백질 분석을 포함한 수 많은 연구 분야에서 유용합니다.
q PCR 데이터 분석법
보고자 분자의 형광은 측정되고 정량되며, 이는 일반적으로 둘 중 하나의 염료(즉, SYBR® Green, 브롬화에티듐)이며 이중 사슬 DNA 또는 DNA의 특정 서열에 부착되도록 디자인된 프로브(즉, Molecular Beacons, TaqMan® probes)의 염기 사이에 삽입됩니다.
q PCR 데이터의 상대적 정량화
qPCR 데이터를 위한 두 개의 주요 정량화 방법이 있습니다. 가장 일반적인 방법인 상대적 정량화는 ΔΔCt 정보를 사용하며, 이는 시료에서 표적 유전자의 발현 또는 풍부성 비율을 결정하여, 대조 유전자와 비교하고 참조 유전자의 발현비로 정상화합니다. 표적 및 참조 유전자의 효율성 E 값이 상이하므로, 이 방법은 E 값의 차이를 설명합니다. 이 방법은 유전자 발현 분석에서 더 자주 활용됩니다.
q PCR 데이터의 절대적 정량화
두 번째 방법인 절대적 정량화는 환경 미생물학에서 더 일반적이며 표준곡선(SC)을 이용합니다. SC 방법은 알려진 주형(template) 농도, N0의 계열희석을 사용하며, log(N0) 대비 CT(임계주기)의 선형회기를 활용하여 표준 곡선을 생성합니다. 이후 이를 사용하여 해당 시료의 주형 농도를 계산합니다. 이 방법의 기초는 시료와 표준물의 효율성 값이 동일하다는 것입니다.
관련 기술 문서
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