핫스타트 PCR
PCR 반응에는 증폭, dNTPS, 버퍼 및 Taq DNA 중합효소를 위한 템플릿 배열을 포함한 여러 중요한 시약이 필요하며, 이들은 효소와 같이 dNTP 통합을 촉진하고 궁극적으로 표적 시퀀스의 새로운 복사본을 만듭니다. 핫스타트 PCR 방법 및 시약의 기본 원칙은 열 활성화 단계가 발생할 때까지 반응 설정 중 핫스타트 Taq DNA 중합효소 활성이나 변형된 dNTP의 통합을 억제하도록 설계된다는 것입니다. 핫스타트 중합효소 활성을 중지시키기 위한 여러가지 방법이 있으며, 여기에는 화학적 변형, 항체 매개 및 압타머(aptamer) 매개 기술이 포함됩니다. 자세한 내용은 핫스타트 PCR 기술에 대한 추가 설명과 이를 통해 표적 특이성 및 수율을 개선하는 방법에 대한 유용한 정보가 포함된 Hot Start PCR 동영상을 참조하십시오.
핫스타트 PCR 프로토콜
핫스타트 PCR, 중첩(nested) PCR 및 멀티플렉스 PCR의 이점
핫스타트 PCR의 장점은 비특이적 증폭 없이 편리한 실온 설정 및 프라이머 이량체를 형성할 수 있다는 것이며, 두 가지 모두에서 표적 시퀀스 특이성과 전체 수율을 감소시킬 수 있습니다. 중첩 PCR 및 멀티플렉스 PCR과 같은 대체 PCR 방법은 서로 다른 시약 및 전략을 활용하여 한 개 이상의 앰플리콘에 대해 특이성과 높은 수율을 제공할 수 있습니다. 중첩 PCR은 프라이머 두 세트를 사용하며, 첫 번째 세트는 첫 증폭 라운드에서 바로 표적 시퀀스의 바깥쪽 시퀀스를 향합니다. 두 번째 프라이머 세트는 첫 번째 라운드의 표적 시퀀스에 특정되며, 그런 다음 중첩된 프라이머를 사용해 두 번째 PCR 라운드의 템플릿으로 사용됩니다. 멀티플렉스 PCR은 특이성을 높인 프라이머 여러 세트를 사용하여 동일한 반응 동안 여러가지 표적 시퀀스를 동시에 증폭합니다. 각 PCR 방법은 다양한 이점을 제공하므로 연구자의 특정 요구에 따라 선택해야 합니다.
KOD 핫스타트 DNA 중합효소 및 마스터 믹스
KOD 핫스타트 DNA 중합효소는 두 가지 특이성이 높은 단클론 항체를 사용하여 실온에서 3′→5′ 핵산말단 분해효소 활성을 억제하는 KOD DNA 중합효소의 사전혼합 복합체입니다. KOD 핫스타트 DNA 중합효소는 잘못된 프라이머 및 프라이머 이량체 형성을 제거하고 유전자 DNA 템플릿(최대 12 kb), 플라스미드 및 람다 DNA 템플릿(최대 21 kb)의 긴 가닥 증폭에 이상적인 시약입니다. KOD Xtreme 핫스타트 DNA 중합효소는 PCR에 최적화된 효소를 활용하여 길고 GC가 풍부한 템플릿을 증폭하며, 식물 조직 및 미나리아재비 끝단을 포함한 미가공 샘플 또는 증폭이 어려운 샘풀에서 템플릿을 성공적으로 증폭합니다. 또한 당사의 KOD 핫스타트 마스터 믹스는 KOD 핫스타트 DNA 중합효소, dNTP 및 최적화된 반응 버퍼를 즉시 사용 가능한 2X 혼합물에 결합한 복합 솔루션을 제공합니다.
KOD 핫스타트 유전체 및 람다 DNA 증폭
왼쪽 그림은 인간 마이오신 중쇄 유전자(8.4 kb)와 인간 베타 글로빈 유전자(12.3 kb)의 KOD 핫스타트 DNA 중합효소를 사용한 유전체 DNA 증폭을 보여줍니다. 오른쪽 그림은 적절한 프라이머와 KOD 핫스타트 DNA 중합효소를 사용하여 증폭된 람다 DNA를 보여줍니다. M = 표지(Marker)
KOD 핫스타트 DNA 중합효소와 마스터 믹스를 다음 조건으로 구입하십시오. 20 % 할인을 받으시려면 계산 시 코드 SBJ를 사용하십시오. 본 행사는 2019년 12월 31일 종료되며 일부 국가에 한해 유효합니다.*
FastStart™ Taq DNA 중합효소 및 High Fidelity PCR 시스템
FastStart™ Taq DNA 중합효소는 단일 표적 핫스타트 PCR 증폭과 멀티플렉스 응용 분야에 적합합니다. 여기에 더해, the FastStart™ High Fidelity PCR 시스템은 FastStart™ Taq DNA 중합효소와 화학적으로 변형된 열안정 상태의 교정 단백질을 배합하여 사용합니다. FastStart™ 중합효소와 교정 단백질 모두 75 °C 아래에서 비활성이며 95 °C에서 약 2분만 가열하면 차단군(blocking group)이 제거되어 활성화됩니다.
인간 유전체 DNA의 FastStart™ High Fidelity PCR 시스템 증폭
인간 유전체 DNA는 4.8 kb 절편 tPA 유전자를 증폭하는 데 사용되었습니다.. FastStart™ High Fidelity PCR 시스템은 다른 두 공급업체의 효소 대비 더 높은 감도와 특이성을 보였습니다.
JumpStart™ Taq ReadyMix™ 및 Taq DNA 중합효소
항체 매개 억제제를 활용하는 JumpStart™ Taq 중합효소는 70 °C 이상의 온도에서만 반응이 활성화되어 항체가 효소에서 분리됩니다. 항체-효소 복합체를 사용하면 표준 핫스타트 PCR, qPCR 및 멀티플렉스 PCR에 대해 비특이적 증폭을 줄이면서 실온에서 편리하게 구성할 수 있습니다. 또한, JumpStart™ Taq ReadyMix™은 JumpStart™ 효소가 제공하는 동일한 기능과 옵션으로 불활성 겔-로딩 염료가 추가된 ReadyMix™ PCR 반응 혼합물이 제공하는 PCR에 필요한 나머지 구성 요소를 결합합니다.
JumpStart™ REDTaq® ReadyMix™ 반응 혼합물이 포함된 람다 파지 증폭
200 ng의 람다 파지 DNA는 Sigma의 JumpStart REDTaq ReadyMix™(홀수 레인) 및 competitor Direct Load ReadyMix(짝수 레인)로 증폭되었습니다.
AptaTaq™ Fast DNA 중합효소 및 AptaTaq™ Fast PCR 마스터
대체 핫스타트 PCR 시약이 항체 매개 방법 또는 화학적을 변형된 DNA Taq 중합효소를 사용하는 반면, AptaTaq™ Fast DNA 중합효소는 실온에서 반응 설정 중 비특이적인 적용을 억제하기 위해 압타머 기술을 통합합니다. 게다가 AptaTaq™ Fast PCR Master는 빠른 반응 설정과 훨씬 더 빠른 반응 시간을 위해 압타머 매개 핫스타트 Taq 중합효소와 DNA 템플릿 및 프라이머를 제외한 모든 시약을 편리하게 제공합니다. AptaTaq™ Fast DNA 중합효소는 70 °C 이상의 온도에서 활성화되며 특정 프라이밍 및 고속 PCR 응용 분야에 이상적입니다.
AptaTaq™ Fast PCR 마스터를 사용하는 PCR 증폭
AptaTaq™ Fast PCR 마스터를 사용하는 PCR 반응은 competitor master mix 대비 우수한 증폭을 보여줍니다.
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