클로닝 및 발현
포유류 세포에서의 재조합 단백질 발현
클로닝 및 유전자 발현 기술은 여러 분야에서 연구자들이 광범위한 생물학적 의문점을 조사하도록 이용되며, 몇 가지 예를 들면 유전자 기능 이해, 분자 경로 분석, 배아 발달, 질병 연구 그리고 생물의약품 및 제약품이 포함됩니다. 유전자 또는 유전적 서열이 식별되면, 연구자들은 특정한 애플리케이션 필요성을 바탕으로 최상의 분자 클로닝 전략과 세포기반 단백질 발현 시스템을 선택해야 합니다. CRISPR 기술을 이용한 유전자 발현 또는 RNAi 시약을 활용한 유전자 침묵화에 관한 추가 정보를 위해, 자사의 유전자 발현 및 유전자 침묵화 페이지를 방문하십시오.
관련 기술 문서
- The term “Restriction enzyme” originated from the studies of Enterobacteria phage λ (lambda phage) in the laboratories of Werner Arber and Matthew Meselson.
- This cloning protocol includes selecting the cloning system and plasmid vector, plasmid restriction digestion, fragment restriction digestion, gel excision, dephosphorylating DNA and more.
- Transfection is the introduction of DNA, RNA, or proteins into eukaryotic cells and is used in research to study and modulate gene expression. Thus, transfection techniques and protocols serve as an analytical tool that facilitates the characterization of genetic functions, protein synthesis, cell growth and development.
- The 3xFLAG system is an improvement upon the original system by fusing 3 tandem FLAG® epitopes for a total of 22 amino acids. Detection of fusion proteins containing 3xFLAG is enhanced up to 200 times more than any other system.
- For best results, ligation reactions must be heat inactivated at 70º C for 15 minutes before transformation. Alternately, the reactions may be purified.
- 모두 보기 (26)
관련 프로토콜
- Restriction enzyme collection has been optimized for digestion using five unique buffers.
- This page describes the characteristics of pGEX expression vectors used with Cytiva products.
- The cloning process requires the ligation of linear DNA into a cloning vector. This ability to join fragments of DNA through recombinant technology is essential for many basic experiments in biotechnology.
- Technical Article on competent cells. Transformation is a process by which some bacteria take up foreign genetic material (naked DNA) from the environment.
- Dephosphorylation of DNA using Calf Intestinal Alkaline Phosphatase, Shrimp Alkaline Phospha, Bovine Intestinal Alkaline Phosphatase
- 모두 보기 (35)
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단백질 발현 벡터
플라스미드 또는 단백질 발현 벡터는 원형 DNA이며 관심 있는 단백질의 클로닝 및 발현을 위한 여러 기능성 요소를 포함합니다. 적절한 발현 벡터의 선택은 단백질 유형, 해당 단백질을 발현하는 유기체 그리고 특정한 애플리케이션 및 과학자들이 해결하기 위해 목표로 하는 과학적 의문점에 의해 부분적으로 결정됩니다. 과학자들이 어느 클로닝, 클론 선택 및 단백질 발현 요소가 자신들의 연구를 위해 최선인지 선택할 수 있도록 매우 다양한 발현 백터가 있습니다. 관심 있는 유전자 서열과 발현 벡터를 선택하면, 과학자들은 핵산분해효소를 사용하여 특정 부위에서 벡터를 정확하게 절단하여 관심 있는 유전적 서열이 인프레임되도록 클론하여 숙주 유기체에서 최종적으로 발현되도록 합니다. 중요한 점은, -70 °C에서 냉동 보관될 때 안정한 재조합 DNA 플라스미드를 위해 과학자들이 화학적 수용성 세포와 박테리아 형질변화를 사용한다는 점입니다.
세포 전달감염 방법
세포 전달감염은 DNA나 RNA 또는 단백질을 진핵 세포에 도입하는 공정을 지칭합니다. 과학자들이 이 부분의 단백질 발현 공정을 성취하도록 다양한 물리적, 화학적 그리고 생물학적 기술이 존재합니다. 전기천공과 같은 물리적 방법 또는 인산칼륨(CaPi), 폴리에틸렌이민(PEI) 및 리포펙션을 포함하는 화학적 방법들이 과학자들에 의해 일반적으로 이용됩니다. 렌티바이러스, 온코리트로바이러스, 아데노바이러스를 포함하는 바이러스 형질도입 시스템 또한 과학자들이 사용합니다. 그러나, 바이러스 전달법의 사용은 생물안전성 사유를 위해 추가적인 격납법과 모니터링을 필요로 합니다.
단백질 발현 시스템
과학자들은 자신의 관심 단백질을 발현하기 위해 여러 유기체들을 이용합니다. 박테리아가 발현 벡터를 효과적으로 수용하고, 빠른 배가시간을 가지며, 최상의 조건에서 높은 수량의 재조합 단백질을 생산하므로 과학자들이 일반적으로 이용합니다. 하지만, 박테리아는 원핵 유기체이므로, 일부 단백질이 필요로 하는 단백질 번역후 변형을 제공하지 못합니다. 효모 및 포유류 세포주를 포함하는 진핵 세포는 단백질 번역후 변형을 촉진하여 과학자들이 또한 일반적으로 사용합니다. 재조합 단백질 발현을 위한 최상의 세포주 선택 및 단백질 발현 전략은 특정한 애플리케이션 필요성 및 과학자들이 해결하기 위해 목표로 하는 과학적 의문점에 의해 크게 의존합니다.
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