Nucleic Acid Labeling & Detection

Nucleic Acid Labeling and Probes

핵산은 분자 전체 또는 5' 및 3' 말단에서 표지될 수 있습니다. 핵산 프로브는 노던 블롯에서 RNA 또는 서던 블롯에서 DNA 검출과 같은 혼성화 분석에 특히 유용합니다. 표지된 데옥시뉴클레오티드(dNTP) 또는 뉴클레오티드 삼인산(NTP)을 사용한 PCR, 무작위 프라이밍 및 닉(nick) 번역을 포함하여 다양한 표지 방법을 사용하여 프로브 전체에 표지를 배포합니다. 말단 라벨링은 입체적 장애를 피하기 위해 핵산-단백질 상호작용을 조사하는 분석에 특히 유용합니다.

핵산 표지법(labeling) 및 검출 분석법

표지법에 따라서, 효소표지 탐색자(probe)를 위해 발색 검출법이 자주 사용되지만, 자가방사선 검출법은 방사능 탐색자에 적절합니다. 일반적인 탐색자는 디곡시제닌(DIG) 및 플루오르세인(fluorescein) 표지 탐색자 등을 포함하며 발색 반응(예, 알칼리인산분해효소)과 결합되는 경우 다양한 색상의 프로브 검출을 촉진하기 위해 병용으로 사용될 수 있습니다. 유사하게, PCR을 활용한 Biotin-16-dUTP의 통합은 추가적인 표지법 및 검출법으로서 일반적인 DNA 중합효소를 이용하여 또한 가능합니다. 형광 제자리(in situ) 부합법(FISH)은 형광 프로브를 이용하여 DNA 서열을 검출하며 성공적인 검출과 다운스트림 분석은 연구자가 이용할 수 있는 형광 현미경의 민감도와 해상도에 따라 일부 결정됩니다.

표지된 DNA 및 RNA 애플리케이션

고체상 막으로 거대분자의 이동은 블로팅(blotting)으로 알려져 있습니다. 표지된 프로브의 특이성으로 인해, 핵산과 프로브의 부합화는 핵산 복합혼합물에서 DNA 및 RNA 서열을 동시에 검출하는 능력을 제공합니다. 뿐만 아니라, 분석에 따라서 이러한 방법은 유전자 발현 분석, mRNA 크기 및 복사본 수를 포함하는 추가적인 귀중한 정보를 수집하도록 허용합니다. 제자리(In situ) 부합화는 연구자가 하나 이상의 다르게 표지된 프로브(e.g. DIG 및 플루오르세인 표지 탐색자)를 검출하도록 자주 사용됩니다.