UDGHL-RO

ウラシル-DNAグリコシラーゼ、熱に不安定

recombinant from marine bacterium BMTU 3346

• 別名: PCR, UDG
• Enzyme Commission number: 3.2.2.15 (BRENDA, IUBMB)
• UNSPSCコード: 41106300

特性

• 由来生物: bacterial (marine bacterium BMTU 3346)
• 品質水準: 100
• リコンビナント: expressed in E. coli
• 形状: solution
• 包装: pkg of 100 U (11775367001); pkg of 500 U (11775375001)
• メーカー／製品名: Roche
• 濃度: 1000 U/mL
• テクニック: activity assay: suitable
• 色: colorless
• 最適pH: 8.3-8.9
• 溶解性: water: soluble
• 適合性: suitable for enzyme test
• アプリケーション: life science and biopharma
• その他の活性: DNA decontamination:, present ( >= 10 e5 copies ); RNases with MS- II- RNA ≤10 units, none detected; Unspec.nucleases w. lambda-DNA 20 units, none detected; Unspec.nucleases w.M13mp9ss-DNA ≤20 units, none detected; Unspec.nucleases w.pBR 322-DNA ≤20 units, none detected
• 保管温度: −20°C

詳細

詳細

熱に不安定なウラシルDNAグリコシラーゼは、海洋細菌BMTU 3346に見られる同等の名前の酵素を含んでいます。大腸菌由来のUNGと同様に、一本鎖または二本鎖DNAのウラシルグリコシド結合を加水分解し、ウラシルを切除し、アルカリ感受性を持つ脱塩基部位をDNAに作成します。これらの脱塩基部位は、エンドヌクレアーゼ、熱、またはアルカリ処理によって加水分解できます。DNAの調製方法に応じてウラシル-DNAグリコシラーゼを使用し、一般的、部位特異的、または鎖特異的にU-DNAを開裂できます。この酵素は熱安定性が低いため、容易に不活性化できます。

酵素の特性
BMTU 3346酵素は、対応する大腸菌由来の酵素（+95°Cで10分）より早く（+95°Cで2分）不活性化されます。また、大腸菌由来のUNGは部分的に活性のままとなり、dUを含むPCR生成物の分解を引き起こすことも報告されています。対照的に、+2～+8°Cの温度で少なくとも数時間の培養時間内に、熱に不安定なUNGがdU-PCR生成物を分解することはありません。したがって、増幅直後にPCR生成物を凍結したり、反応混合物を-70°Cに保持したりする必要はありません。

特異性

• ウラシルDNAグリコシラーゼは、一本鎖および二本鎖DNAのU-DNA部位でウラシル-グリコシド結合を加水分解してウラシルを切除し、アルカリ感受性を持つ脱塩基部位をDNAに作成します。
• この酵素は、一本鎖DNAと二本鎖DNAの両方で活性を持ちます。
• ウラシルDNAグリコシラーゼは、RNAおよびネイティブのウラシルフリーDNAに対して不活性です。
• ウラシルDNAグリコシラーゼには金属イオン要件がないため、EDTA存在下で完全な活性を持ちます。

熱失活：95°Cで2分間

アプリケーション

ウラシル-DNAグリコシラーゼは、デオキシウリジル酸残基が組み込まれた部位でDNAを切断するのに使用できます。ウラシル-DNAグリコシラーゼは熱に不安定であるため、この酵素の主な用途はPCRにおける持ち越し汚染を防止することです。大腸菌由来の酵素とは対照的に、UNGのこの調製を使用すると、増幅直後にPCR生成物を凍結したり、反応混合物を+70°Cに保持したりする必要はありません。

重要な注意：リアルタイムPCRなどの高感度技法には、この用途に最適化されたLightCycler^® Uracil-DNAグリコシラーゼをお勧めします。

特徴および利点

• PCRでの持ち越し汚染の防止
• 部位特異的突然変異誘発手順の効率化
• オリゴヌクレオチドプローブの標識付け
• 酵素の熱安定性が低いため、対応する大腸菌由来の酵素より速く不活性化します。
• +2～+8°Cの温度で少なくとも数時間の培養時間内に、dU-PCR生成物が分解されることはありません。

内容
酵素は、貯蔵緩衝液に入った1 U/μlの溶液として供給されます。

品質

機能試験：テンプレートを含む約105 dUを増幅反応の前に追加して持ち越し防止活性を分析します。UNG処理後は増幅生成物を検出できませんでした。
現在の品質管理手順によれば、酵素には汚染エキソヌクレアーゼやエンドヌクレアーゼが含まれず、RNase活性もありません。

単位の定義

1ユニットは、精製された一本鎖ウラシル含有DNA（大腸菌CJ236 dut-ung-で増殖したバクテリオファージM13）1 μgを+37°C、60分で完全に分解するのに必要なウラシルDNAグリコシラーゼの量として定義されます。
1リンダールユニットは、+37°C、1分間で1 molのウラシルを放出するのに必要な酵素の量として定義されます。1リンダールユニットは、弊社のユニットの定義では520,000ユニットに相当します。

体積活性：1 U/μl

その他情報

実験室での一般的用途向け

法的情報

LightCycler is a registered trademark of Roche

安全性情報

• 危険有害性情報: H412
• 注意書き: P273 - P501
• 危険有害性の分類: Aquatic Chronic 3
• 保管分類コード: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 2
• 引火点(°F): does not flash
• 引火点(℃): does not flash