SMAI-RO

Sma I

from Serratia marcescens Sb

• UNSPSCコード: 12352204

特性

• 由来生物: Serratia marcescens
• 品質水準: 100
• フォーム: solution
• 比活性: 10000 U/mL
• 包装: pkg of 1,000 U (10220566001 [10 U/μl]); pkg of 5,000 U (10656348001 [10 U/μl]); pkg of 5,000 U (11047639001 [40 U/μl])
• メーカー／製品名: Roche
• 濃度: <0.1 % (w/w)
• パラメーター: 25 °C optimum reaction temp.
• テクニック: electrophoresis: suitable
• 色: colorless
• pH: 7.0 (39 °F)
• 溶解性: water: miscible
• 適合性: suitable for molecular biology
• アプリケーション: life science and biopharma
• その他の活性: Endonucleases, none detected (up to 20 U with lambda-DNA); Endonucleases, none detected (up to 20U with pBR 322-DNA )
• 輸送温度: dry ice
• 保管温度: −20°C

詳細

詳細

Sma Iは、配列*C°C*C↓GGGを認識し、平滑末端を持つ断片を産生します。

特異性

認識部位：*C °C*CGGG
*C °C*CGGG
制限部位：*C °C*C↓GGG
*C °C*C↓GGG
熱失活：Sma Iは、65°Cで15分間インキュベートすることで不活性化されます（100 U/μg DNAまで試験済み）。

アプリケーション

Sma Iはマクロ制限分析で使用されています。また、制限消化、アミド高速パルスフィールドゲル電気泳動（PFGE）における制限酵素混合物にも使用されています。

品質

非特異的エンドヌクレアーゼ活性がない
1 μgのλDNAを50 μLのSuRE/CutバッファーA中、過剰のSma Iを添加して16時間インキュベートします。酵素の単位数が酵素による特有の制限パターンに影響を与えないことは分析証明書に示されています。

エキソヌクレアーゼ活性がない
約5 μgの[3H]標識した仔牛胸腺DNAを3 μLのSma Iを用いて総容量100 μL中50 mM Tris-HCl、10 mM MgCl₂、1 mMジチオエリスリトール、pH 約7.5において、+37°Cで4時間インキュベートします。本条件下で、分析証明書に示されているように、放射能の放出は検出されていません。

DNAプロファイル

各種DNAにおける切断部位数

• λ：3
• φX174：0
• Ad2：12
• M13mp7：0
• pBR322：0
• pBR328：0
• pUC18：1
• SV40：0

単位の定義

1ユニットは、総量25 μL（1×）のSuRE/CutバッファーAにおいて+25°C、1時間で1 μgのλDNAを完全に切断する酵素活性です。

保管および安定性

−25°C以下で保存しないこと

アナリシスノート

Compatible ends（共通な末端）
Sma Iは平滑末端と共通の末端を生成します。

アイソシゾマー
本酵素はCfr9 I、PspA I、Xma IおよびXmaC Iのアイソシゾマーです。

メチル化感受性
Sma Iは認識配列の3つのC残基の中央（°）で5-メチルシトシンによる阻害を受けませんが、他のC（*）で5-メチルシトシンにより、または認識配列（*C°C*C↓GGG）中の任意の位置で4-メチルシトシンにより活性が阻害されます。

インキュベーション温度
+25°C

PFGE試験済み
Sma Iはパルスフィールドゲル電気泳動（細菌の染色体）でテストされています。PFGE分析のためにアガロースに埋め込んだゲノムDNA（E. coli C 600）の切断については、酵素10 U/μg DNAおよび4時間のインキュベーションを推奨します。

Ligation and recutting（ライゲーション‐再切断）検定
1μgのλDNAを完全に消化して得られたSma I断片を、1 UのT4 DNAリガーゼを用いて10 μL中、66 mM Tris-HCI、5 mM MgCl₂、5 mM ジチオエリスリトール、1 mM ATP、pH 7.5（+20°C時）において+25°C、16時間インキュベートした結果、1μgのλDNA断片の>80％が回収されます。
引き続きSma Iで再切断を行うと>80％のλDNA × Sma I断片の典型的なパターンが得られます。

SuRE/Cutバッファーシステム
至適な活性のために太字で示されたバッファーを推奨します。

• A：100％
• B：0～10％
• H：0～10％
• L：0～10％
• M：0～10％

PCRバッファー中の活性：100％

PCR mix（Taq DNAポリメラーゼバッファー）中の相対活性は100％です。PCR mixはλDNA、プライマー、10 mM Tris-HCl（pH 8.3、20°C）、50 mM KCl、1.5 mM MgCl₂、200 μM dNTP、2.5 U Taq DNAポリメラーゼを含みます。混合液は25サイクルの増幅反応にかけられました。PwoSuperYield DNAポリメラーゼPCR Mixの反応バッファー中の活性は100％です。GCリッチ溶液を追加しても活性は100％を維持します。Pwo SuperYield DNAポリメラーゼPCR Mixは米国では入手できません。

その他情報

ライフサイエンス研究専用。診断目的での使用はできません。

キットの構成要素のみ

• Enzyme Solution
• SuRE/Cut Buffer A 10x concentrated

安全性情報

• 保管分類コード: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 1
• 引火点(°F): does not flash
• 引火点(℃): does not flash