COHISR-RO

cOmplete^™ His-タグ精製樹脂

suspension, suitable for protein purification, matrix Sepharose-CL 6B

• UNSPSCコード: 41116133
• NACRES: NA.21

特性

• 形状: suspension
• 包装: pkg of 200 mL (05893801001 [settled resin volume]); pkg of 25 mL (05893682001 [settled resin volume])
• メーカー／製品名: Roche
• テクニック: protein purification: suitable
• マトリックス: Sepharose-CL 6B
• 保管温度: 2-8°C

詳細

詳細

ビーズのサイズ：45～165 μM

結合容量：≧ 40 mgタンパク質/mL 樹脂床容積。様々な種類のタンパク質に対する樹脂の結合容量は、サイズなどタンパク質の性質に応じて異なるかもしれません。cOmplete His-タグ精製カラムは、ポリヒスチジンタグを持ったタンパク質に対し、高い特異性で結合します。その結果として、結合の動力学は、従来の金属キレートマトリックスと比較した場合に、異なって見えることがあります。cOmplete His-タグ精製カラムの結合容量をフルに利用するには、クロマトグラフィー精製に流速を下げ、タンパク質の樹脂への結合により時間をかけることによって達成できます。

最大線流速：1,420 cm/時間

推奨体積流量：体積流量は、カラムの断面に相関します。以下の式を使用して、線流速を体積流量（mL/分）に変換できます：線流速（cm/時間） × カラム断面積（cm²）/60。カラム断面積は、π× r²として定義され、πは定数パイであり、rはカラムの内半径です。

ロードおよび洗浄用の推奨イミダゾール濃度：His-タグを持たないタンパク質の非特異吸着は少量です。ロードおよび洗浄バッファーのイミダゾール濃度は5 mMまで使用できます。cOmplete His-タグ精製カラムで、His-タグタンパク質の精製用の新しいアッセイを確立する場合は、イミダゾールを使用しないでください。例えば、His-タグタンパク質の純度を、この最初のステップの後に改善する必要がある場合は、二番目のステップにおいて、最終濃度 5 mMまでのイミダゾールを使用してください。

溶出用イミダゾールの推奨濃度：最大500 mM。以下に注意してください：他の樹脂製品とは逆に、cOmplete His-タグ精製カラムに結合したHis-タグタンパク質は、25～45 mMという低いイミダゾール濃度で溶出されます。

長期保存時の適合性：20％エタノール、pH 4.0～pH 9.0

クロマトグラフィー時の適合性：本樹脂は、10 mM EDTA、10 mM DTT（精製における1時間のインキュベーション）、6 M塩酸グアニジン、8 M尿素、pH 2.0～pH 14.0に適合します。

洗浄時の適合性：4％SDS

cOmplete His-タグ精製樹脂は、バッチまたは液体クロマトグラフィーによる、トータルライセートからのヒスチジン-タグタンパク質の精製のための、革新的な高結合容量IMAC（固定化金属アフィニティクロマトグラフィー）マトリックスです。NTAやIDAキレーター化学に基づく、現在利用できる全ての樹脂と比較して、本樹脂は、EDTAを含むバッファーに耐性のある唯一の市販品です。EDTAは多くの細胞に存在するメタロプロテアーゼの阻害剤であるため、このクロマトグラフィー材料は、EDTAをバッファーに含めることでターゲットタンパク質の保護を向上させるというオプションを提供します。そのため、本樹脂は、タンパク質を分解から保護すると同時に、確立された方法であるアフィニティ精製によってタンパク質を濃縮できます。
さらに、本樹脂は、タンパク質の分子量の大きさにかかわらず、その結合容量を維持し、その特異性によってワンステップでの精製を可能にします。強力なキレート剤の1つを使用することによって、金属イオンによる素通り画分のコンタミネーションを最小限に抑え、お客様のダウンストリームアプリケーションを保護します。
cOmplete His-タグ精製樹脂は、プレパックフォーマットでも利用できます （1 mLまたは5 mLの樹脂）。

アプリケーション

リコンビナントタンパク質の発現

目的タンパク質の精製は、その機能、構造、または相互作用の解析、特異的抗体の作成、あるいは、実用的なアプリケーションに使用する酵素の調製において不可欠です。天然に発現しているタンパク質を天然資源から精製する場合には、多くのクロマトグラフィーステップを含む複雑な工程が必要です。専用の宿主生物におけるリコンビナントタンパク質の発現は、この課題を極めてシンプル化します。このような発現システムは、通常、高い発現レベルを確かなものにします。また、ターゲットタンパク質とタグとの融合は、利点となるアフィニティマトリックスへの結合能を付与します。

固定化Ni²⁺を使用するタンパク質の精製

タンパク質のアフィニティ精製における最も一般的なテクニックは、タンパク質のN-またはC-末端（あるいは露出したループ）への6～14個のヒスチジン配列の組み込みです。このようなポリヒスチジンストレッチは、ニッケルやコバルトなどの二価金属イオンと強く結合します。この効果はタンパク質の分離に使用できます。金属イオンはキレーターを使用してマトリックス上に固定化でき、その金属イオンはタンパク質中のポリヒスチジンタグと相互作用できます。これらのHis-タグタンパク質が、固定化金属イオンを含むカラムを通過した際、タンパク質はタグを介してカラムに結合します。ほとんど全ての非標識タンパク質が、カラムを素通りします。タンパク質は、ポリヒスチジンタグとカラムとの結合を阻害するイミダゾールとの溶出か、あるいは、pHを下げて、タグのカラムへのアフィニティを低下させる方法によって回収されます。この手順は、一般的には、アフィニティタグを組み込んだリコンビナントタンパク質の精製に使用されますが、二価のカチオンに親和性を持った天然のタンパク質にも使用できます。

His-タグ

理論上、His-タグタンパク質は、宿主の発現する内因性のヒスチジン含有タンパク質よりも強く、Ni²⁺キレートマトリックスに結合します。相対的な結合力は、何個のヒスチジンがマトリックスに同時に結合できるかに依存します（結合活性効果）。より長いHis-タグは、より強く結合するため、ホスト由来の夾雑タンパク質からターゲットをより分離できます。古典的なHis-タグは、6つの連続したヒスチジンを持っています。10～14のヒスチジンを持ったタグは、より優れた精製を提供することがあります。最も重要なことは、Ni²⁺キレートマトリックスを使用して、ネイティブと変性条件の両方においてHis-タグタンパク質を精製できることです。これらのマトリックスは、その親水性かつ柔軟な性質から、ターゲットタンパク質の溶解性を向上させ、タンパク質の機能にほとんど影響を及ぼしません。この独自の特徴の組み合わせによって、His-タグは、幅広いタンパク質精製アプリケーションのための多用途なツールとなり得ます。

特徴および利点

cOmplete His-タグ精製樹脂は、妥協することなく大量のタンパク質を精製できる唯一の樹脂です。

• 使用するタンパク質に最適なバッファー条件を使用してください：精製樹脂ではなく、使用するタンパク質に最適な条件を保ち、DTT、EDTA、または他のバッファーを使用するかどうかを決定してください。
• 高純度なタンパク質が繰り返し得られます：樹脂を再充填する必要のない、単一ステップによる精製。
• 使用するタンパク質を、毒性のあるニッケルから保護します：ニッケルの浸出した樹脂によって引き起こされるタンパク質の酸化や凝集を抑えます。
• 安全かつエコ環境での作業：毒性のあるニッケルの取り扱いを避け、廃棄費用を完全になくします。

物理的形状

Ni^{2+でプリチャージした、50％の樹脂懸濁液}

その他情報

ポリヒスチジンタグを持ったタンパク質の精製のための、EDTA適合性樹脂。

ライフサイエンス研究のみに使用できます。診断には使用できません。

法的情報

cOmplete is a trademark of Roche

安全性情報

• ピクトグラム: GHS02,GHS07,GHS02
• シグナルワード: Warning-Warning
• 危険有害性情報: H226 - H319 - H226
• 注意書き: P210 - P280 - P210 - P233 - P240 - P241 - P242 - P243 - P303 + P361 + P353 - P337 + P313 - P370 + P378 - P403 + P235
• 危険有害性の分類: Flam. Liq. 3
• 保管分類コード: 3 - Flammable liquids
• WGK: WGK 1
• 引火点(°F): 93.2 °F
• 引火点(℃): 34 °C