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ゲノピュア・プラスミド・ミディ・キット

kit of for 20 isolations from 5 to 30 ml

• 別名: プラスミドの分離
• UNSPSCコード: 41105500

特性

• 品質水準: 100
• メーカー／製品名: Roche
• 包装: kit of for 20 isolations from 5 to 30 ml

詳細

詳細

プラスミドの回収は 50 µg の精製したプラスミドを用いて確認しました。回収は >90%であり、80%以上は超らせん構造でした。プラスミド DNA の収率は DH5a 細胞から pBS を単離することにより測定しました。A600 における菌体濃度が 3～6 の、30 mL の培養液から、>85 µg のプラスミド DNA が得られています。

その純度（A260/A280 の比により確認）は 1.8 + 0.2 です。

RNA は検出されませんでした。

キットの内容物がヌクレアーゼを含まないことを、現在の品質管理手順に従って検査しています。

アプリケーション

The Genopure Plasmid Midi Kit は、細菌培地からトランスフェクショングレードのプラスミド DNA を中程度の量（100 µg プラスミドまで）用意することができます。単離されたプラスミドはほとんどの分子生物学アプリケーションでの使用に適しています：

• トランスフェクション
• サザンブロット
• シーケンシング
• PCR
• 制限酵素による解析
• クローニング

特徴および利点

The Genopure Plasmid Midi Kit（ゲノピュア・プラスミド・ミディ・キット）は、修正アルカリ溶菌法により高度に精製されたプラスミド DNA を中程度の量用意することができます。

• そのまますぐに使える試薬で時間を節約してください。

20 サンプルまで精製できます（計 75 分のうち手で持つ時間は 10 分）。

• すべての大きさ、タイプのプラスミドを精製できます。

粗溶解物はフィルターを通すことによりプラスミドのせん断を避けられるため、BAC DNA でも可能です。

• 複数のサンプルを並行して処理することができます。

高速自然落下カラムを用います。

• 有害な有機化合物の使用を避けることができます

例えば塩化セシウム、フェノール、クロロホルム、エチジウムブロマイドなど。

• 高純度のプラスミド DNA が得られます

塩化セシウム勾配遠心により調製されるプラスミド 2 回分より多く得られます。

構成

• 懸濁バッファー
• RN アーゼ A
• 溶菌バッファー
• 中和バッファー
• 平衡化バッファー
• 洗浄バッファー
• 溶出バッファー
• NucleoBond AX 100 カラム
• 折り畳みフィルター（直径150 mm）
• シーリングリング

品質

本キットで生成したプラスミド DNA を制限酵素による消化に供しました；プロトコルどおりに形質転換された HB101 から、pUC 19 を単離しました。1 µg のプラスミドを1 U の Msp I で 37°C、2 時間完全に消化し、アガロースゲルで確認しました。

プラスミドの回収は 50 µg の精製したプラスミドを用いて確認しました。回収は >90%であり、80%以上は超らせん構造でした。プラスミド DNA の収率は DH5a 細胞から pBS を単離することにより測定しました。A600 における菌体濃度が 3～6 の、30 mL の培養液から、>85 µg のプラスミド DNA が得られています。

その純度（A₂₆₀/A₂₈₀ の比により確認）は 1.8 + 0.2 です。

RNA の混入について、標準的な手順で精製した 3 µg の pBS を用いて解析しアガロースゲル電気泳動で確認したところ、RNA は検出されませんでした。

キットの内容物がヌクレアーゼを含まないことを、現在の品質管理手順に従って検査しています。

調製ノート

単離方法は修正アルカリ溶菌法に基づいており、以下の各段階に分けられます：細菌を部分的に溶菌させ、プラスミド DNA を細胞壁から上清液中に逃がします。より大きい大腸菌染色体 DNA は細胞壁に捕捉されます。溶解物中の細胞残屑は濾過または遠心分離により取り除き、プラスミド DNA を含む画分をあらかじめ平衡化させたカラムにロードします。残屑除去された溶解物は塩分含量の低い状態でカラムにアプライされるため、プラスミド DNA はカラム中のマクロ多孔性陰イオン交換材に結合します。細胞由来の不純物は高塩濃度で洗浄することによりカラムから溶出します。最後に、プラスミド DNA をカラムから溶出させます。回収された DNA は塩を除き、プラスミドを濃縮するため沈殿させます。

アナリシスノート

サンプル：
大腸菌培地、高コピー数のプラスミドを含むもの：5～30 mL の細菌培地
大腸菌培地、低コピー数のプラスミドを含むもの：10～100 mL の細菌培地
プラスミドのサイズ：単離手順はすべてのサイズのプラスミドに適したものです。注意：大きな構成物（100 kb まで）を含む溶解物では、プラスミドのせん断を避けるため、遠心分離よりもろ過により残屑除去ををお勧めします。
操作時間：60 分（溶解物のろ過時間を含む）
標準的な収率：
高コピー数のプラスミド：3～5 µg/mL 培地
低コピー数のプラスミド：0.2～1 µg/mL 培地
生成物の純度：単離されたプラスミド DNA は RNA など、他の菌体成分を含みません。

その他情報

イオン交換クロマトグラフィー

ライフサイエンス研究目的にのみ使用できます。診断用には使用できません。

安全性情報

• ピクトグラム: GHS02,GHS05
• シグナルワード: Danger
• 危険有害性情報: H226 - H290 - H314
• 注意書き: P210 - P280 - P303 + P361 + P353 - P304 + P340 + P310 - P305 + P351 + P338 + P310 - P370 + P378
• 危険有害性の分類: Eye Dam. 1 - Flam. Liq. 3 - Met. Corr. 1 - Skin Corr. 1
• 保管分類コード: 3 - Flammable liquids
• WGK: WGK 1
• 引火点(°F): 100.4 °F
• 引火点(℃): 38 °C