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Nature Methodsでメルクのアプリケーションノートをお読みください！
http://www.nature.com/app_notes/nmeth/2012/121007/pdf/an8620.pdf
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メルクのLentiBriteレンチウイルスバイオセンサーの優位性について詳細をご確認ください！ここをクリック
バイオセンサーは、生きた状態の細胞に特定のタンパク質が含まれるかどうかを検出するだけでなく、そのタンパク質の細胞内部位を検出するためにも使用できます。細胞内目標タンパク質を可視化するための手法としては、蛍光顕微鏡検査あるいは低速度撮影ビデオキャプチャのいずれにおいても蛍光標識がよく用いられます。生細胞を破壊せずに可視化できれば、研究者はリアルタイムで細胞の状態を観察できるようになります。
レンチウイルスベクターシステムは、遺伝子産物を細胞に導入するために幅広く使用されている研究用ツールです。レンチウイルストランスフェクションは、化学に基づくトランスフェクションなどの非ウイルス的な手法、例えば分裂／非分裂細胞の高効率トランスフェクション、導入遺伝子の長期安定発現、および低免疫原性などよりも優れています。
EMD Milliporeは、LentiBriteレンチウイルスバイオセンサーをご紹介しています。これは、生細胞およびin vitro分析においてさまざまな細胞／疾患状態下で可視化を行うための、オートファジー、アポトーシス、および細胞構造に関連する重要で基本的なタンパク質をコードするパッケージ済みのレンチウイルス粒子製品群です。
EMD Millipore’のLentiBrite GFP-Rad51 レンチウイルス粒子では明るい蛍光と正確な位置決定が得られ、トランスフェクトが困難な細胞タイプで Rad51 トランスロケーションの生細胞分析が行えます。
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バイオセンサーは、生きた状態の細胞に特定のタンパク質が含まれるかどうかを検出するだけでなく、そのタンパク質の細胞内部位を検出するためにも使用できます。細胞内目標タンパク質を可視化するための手法としては、蛍光顕微鏡検査あるいは低速度撮影ビデオキャプチャのいずれにおいても蛍光標識がよく用いられます。生細胞を破壊せずに可視化できれば、研究者はリアルタイムで細胞の状態を観察できるようになります。
レンチウイルスベクターシステムは、遺伝子産物を細胞に導入するために幅広く使用されている研究用ツールです。レンチウイルストランスフェクションは、化学に基づくトランスフェクションなどの非ウイルス的な手法、例えば分裂／非分裂細胞の高効率トランスフェクション、導入遺伝子の長期安定発現、および低免疫原性などよりも優れています。
EMD Milliporeは、LentiBriteレンチウイルスバイオセンサーをご紹介しています。これは、生細胞およびin vitro分析においてさまざまな細胞／疾患状態下で可視化を行うための、オートファジー、アポトーシス、および細胞構造に関連する重要で基本的なタンパク質をコードするパッケージ済みのレンチウイルス粒子製品群です。
- パッケージ済み、GFP & RFP を用いた蛍光タグ付き
- 従来の化学ベースのトランスフェクション法やその他のウイルス以外のトランスフェクション法と比較してトランスフェクション効率が高い
- 分裂細胞、非分裂細胞、および初代細胞または幹細胞などのトランスフェクションが困難な細胞にもトランスフェクト可能
- 細胞機能を破壊しない
EMD Millipore’のLentiBrite GFP-Rad51 レンチウイルス粒子では明るい蛍光と正確な位置決定が得られ、トランスフェクトが困難な細胞タイプで Rad51 トランスロケーションの生細胞分析が行えます。
真核細胞における RecA 様組換え酵素である Rad51 は、正常な細胞周期とDNA損傷の修復の両方で起こる相同組換えにおいて重要な役割を果たしています。 しかし、多くの癌に見られるように、細胞内の Rad51 が過剰になると、DNA に損傷を与える放射線療法や化学療法に対する抵抗性が生じ、ゲノムが不安定になります。 二本鎖切断を引き起こす DNA 損傷の際、Rad51 は核細胞質から離散的な核内フォーカスへと癒合しますが、Rad51 が過剰発現している場合、このような核内フォーカスは DNA 損傷のない状態でも生じます。 GFP に融合した Rad51 の発現は、生細胞における Rad51 の区分化の動態を追跡するために用いられています。
EMD Millipore’のLentiBrite GFP-Rad51 レンチウイルス粒子では、明るい蛍光と正確な位置決定が得られ、トランスフェクトが困難な細胞タイプで Rad51 トランスロケーションの生細胞分析が行えます。
EMD Millipore’のLentiBrite GFP-Rad51 レンチウイルス粒子では、明るい蛍光と正確な位置決定が得られ、トランスフェクトが困難な細胞タイプで Rad51 トランスロケーションの生細胞分析が行えます。
アプリケーション
蛍光顕微鏡イメージング：
HeLa 細胞をチャンパースライドに塗布し、レンチウイルス粒子を用いて 20 の MOI で 24 時間かけて導入を行いました。 培地を交換してさらに48時間培養してから、細胞をホルムアルデヒドで固定して標本化しました。 画像撮影は、オイルイマージョン広視野蛍光顕微鏡により行いました。 GFP-Rad51 は核内に様々な点状分布を示し、核小体からは排除されているように見えます。
免疫細胞化学的比較：
U2OS 細胞をチャンバースライドにプレーティングし、MOI＝5 で 24 時間レンチウイルス粒子を形質導入しました。 24時間後に培地を交換してから、細胞をさらに48時間培養しました。 Rad51 に対するポリクローナル抗体（カタログ番号 ABE257）を用いた同じ視野の免疫細胞化学染色（赤）から、GFP-Rad51（緑）と同様の発現パターンが確認されました。
トランスフェクションが困難な細胞タイプ：
初代細胞タイプ HUVEC または HuMSC をチャンパースライドに塗布し、レンチウイルス粒子を用いて、それぞれ 20 と 5 の MOI で 24 時間かけて導入を行いました。
共焦点顕微鏡イメージング：
U2OS 細胞を GFP-Rad51で形質転換しました。 細胞は TRITC-ファロイジンで対比染色し、アクチンフィラメント（赤）と DAPI で核（青）を表示しました。画像撮影は、油浸共焦点蛍光顕微鏡により行いました。
その他の細胞タイプ：
HT1080 細胞を処理。
最適な蛍光の可視化のため、最適な生細胞分析のために、トランスフェクション／感染後 24 ～ 48 時間以内に標的発現レベルを分析することをお勧めします。これは、特にトランスフェクトが困難な細胞株では蛍光強度が経時的に低下する可能性があるためです。感染細胞は、トランスフェクション／インフェクションが正常終了したら凍らせて、さらに培養液中で融解すれば、24～48時間が経過しても陽性蛍光発現が維持されます。 蛍光発現の長さと強度は、細胞株によって異なります。トランスフェクションが困難な細胞株には、より高いMOIが必要になる場合があります。
HeLa 細胞をチャンパースライドに塗布し、レンチウイルス粒子を用いて 20 の MOI で 24 時間かけて導入を行いました。 培地を交換してさらに48時間培養してから、細胞をホルムアルデヒドで固定して標本化しました。 画像撮影は、オイルイマージョン広視野蛍光顕微鏡により行いました。 GFP-Rad51 は核内に様々な点状分布を示し、核小体からは排除されているように見えます。
免疫細胞化学的比較：
U2OS 細胞をチャンバースライドにプレーティングし、MOI＝5 で 24 時間レンチウイルス粒子を形質導入しました。 24時間後に培地を交換してから、細胞をさらに48時間培養しました。 Rad51 に対するポリクローナル抗体（カタログ番号 ABE257）を用いた同じ視野の免疫細胞化学染色（赤）から、GFP-Rad51（緑）と同様の発現パターンが確認されました。
トランスフェクションが困難な細胞タイプ：
初代細胞タイプ HUVEC または HuMSC をチャンパースライドに塗布し、レンチウイルス粒子を用いて、それぞれ 20 と 5 の MOI で 24 時間かけて導入を行いました。
共焦点顕微鏡イメージング：
U2OS 細胞を GFP-Rad51で形質転換しました。 細胞は TRITC-ファロイジンで対比染色し、アクチンフィラメント（赤）と DAPI で核（青）を表示しました。画像撮影は、油浸共焦点蛍光顕微鏡により行いました。
その他の細胞タイプ：
HT1080 細胞を処理。
最適な蛍光の可視化のため、最適な生細胞分析のために、トランスフェクション／感染後 24 ～ 48 時間以内に標的発現レベルを分析することをお勧めします。これは、特にトランスフェクトが困難な細胞株では蛍光強度が経時的に低下する可能性があるためです。感染細胞は、トランスフェクション／インフェクションが正常終了したら凍らせて、さらに培養液中で融解すれば、24～48時間が経過しても陽性蛍光発現が維持されます。 蛍光発現の長さと強度は、細胞株によって異なります。トランスフェクションが困難な細胞株には、より高いMOIが必要になる場合があります。
研究カテゴリー
アポトーシス &癌
アポトーシス &癌
研究サブカテゴリー
細胞周期、DNA複製&修復
細胞周期、DNA複製&修復
構成
TagGFP2-Rad51 レンチウイルス：
25 µLの最低3 x 10E8感染単位（IFU）/mLのレンチウイルス粒子1バイアル。 ロットに固有の力価情報については、データシートの“ウイルス力価”をご覧ください。
プロモーター
EF-1（伸長因子-1）
感染多重度（MOI）
MOI = 感染させた細胞数に対する感染性レンチウイルス粒子数（IFU）の比
高い形質導入効率およびシグナル強度を達成するための典型的なMOI値は、20～40の範囲です。 この標的の場合は、さらに低いMOIが必要になる細胞タイプ（HT-1080、HeLa、U2OS、ヒト間充織幹細胞（HuMSC）など）もあれば、さらに高いMOIが必要になる細胞タイプ（ヒト臍帯静脈内皮細胞（HUVEC）など）もあります。
注記：必要な導入効率とシグナル強度が得られるように、MOI値は各細胞タイプとレンチウイルス標的ごとにご自身で決定して最適化してください。
25 µLの最低3 x 10E8感染単位（IFU）/mLのレンチウイルス粒子1バイアル。 ロットに固有の力価情報については、データシートの“ウイルス力価”をご覧ください。
プロモーター
EF-1（伸長因子-1）
感染多重度（MOI）
MOI = 感染させた細胞数に対する感染性レンチウイルス粒子数（IFU）の比
高い形質導入効率およびシグナル強度を達成するための典型的なMOI値は、20～40の範囲です。 この標的の場合は、さらに低いMOIが必要になる細胞タイプ（HT-1080、HeLa、U2OS、ヒト間充織幹細胞（HuMSC）など）もあれば、さらに高いMOIが必要になる細胞タイプ（ヒト臍帯静脈内皮細胞（HUVEC）など）もあります。
注記：必要な導入効率とシグナル強度が得られるように、MOI値は各細胞タイプとレンチウイルス標的ごとにご自身で決定して最適化してください。
品質
HT-1080細胞を導入し、蛍光画像処理によって導入効率を判定することにより評価しました。
物理的形状
PEG沈殿
保管および安定性
保管および取扱い
レンチウイルスは、-80°Cで保存した場合に受領日から最低4カ月間安定です。 初回の融解後は速やかに氷上に置き、実用アリコートは-80°Cで凍結してください。 凍結アリコートは最低2ヵ月間保存できます。 これ以上凍結融解すると、ウイルス力価と導入効率の低下を招くおそれがあります。
安全性に関する重要事項
本製品に添付されている第3世代ベクターなどの複製欠損レンチウイルスベクターが、ヒトや動物で何らかの疾患を引き起こすことは知られていません。 しかし、レンチウイルスは一体化して宿主細胞ゲノムを形成する可能性があるため、挿入型変異のリスクをもたらすおそれがあります。 原料はリスクグループ2であり、BSL2管理下で取り扱う必要があります。 レンチウイルスベクターのバイオセーフティーに関する詳細な考察は、Pauwels, K. et al. (2009). State-of-the-art lentiviral vectors for research use: Risk assessment and biosafety recommendations. Curr. Gene Ther. 9: 459-474.
レンチウイルスは、-80°Cで保存した場合に受領日から最低4カ月間安定です。 初回の融解後は速やかに氷上に置き、実用アリコートは-80°Cで凍結してください。 凍結アリコートは最低2ヵ月間保存できます。 これ以上凍結融解すると、ウイルス力価と導入効率の低下を招くおそれがあります。
安全性に関する重要事項
本製品に添付されている第3世代ベクターなどの複製欠損レンチウイルスベクターが、ヒトや動物で何らかの疾患を引き起こすことは知られていません。 しかし、レンチウイルスは一体化して宿主細胞ゲノムを形成する可能性があるため、挿入型変異のリスクをもたらすおそれがあります。 原料はリスクグループ2であり、BSL2管理下で取り扱う必要があります。 レンチウイルスベクターのバイオセーフティーに関する詳細な考察は、Pauwels, K. et al. (2009). State-of-the-art lentiviral vectors for research use: Risk assessment and biosafety recommendations. Curr. Gene Ther. 9: 459-474.
法的情報
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
保管分類コード
10 - Combustible liquids
WGK
WGK 2
適用法令
試験研究用途を考慮した関連法令を主に挙げております。化学物質以外については、一部の情報のみ提供しています。 製品を安全かつ合法的に使用することは、使用者の義務です。最新情報により修正される場合があります。WEBの反映には時間を要することがあるため、適宜SDSをご参照ください。
Jan Code
17-10234:
試験成績書（COA）
製品のロット番号・バッチ番号を入力して、試験成績書（COA） を検索できます。ロット番号・バッチ番号は、製品ラベルに「Lot」または「Batch」に続いて記載されています。
ライフサイエンス、有機合成、材料科学、クロマトグラフィー、分析など、あらゆる分野の研究に経験のあるメンバーがおります。.
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