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Merck

Glicosidasi

Glicosidasi per ogni esigenza degli studi di glicobiologia

Le glicosidasi, che comprendono endoglicosidasi ed esoglicosidasi, vengono utilizzate prevalentemente nella ricerca glicomica per il sequenziamento dei glicani, la scissione degli N-glicani (N-linked) e degli O-glicani (O-linked) dalle glicoproteine e per la produzione di glicoproteine. In particolare:

  • le glicosidasi, come la nostra peptide-N-glicosidasi F ricombinante PNGase Fast, consentono una rapida e completa deglicosilazione degli anticorpi e delle proteine di fusione di immunoglobuline, ma anche di altre glicoproteine, ai fini della preparazione per le successive analisi mediante cromatografia o spettrometria di massa.
  • Le polisaccaride liasi e le carboidrati esterasi vengono utilizzate per degradare i glicosamminoglicani (mucopolisaccaridi) e preparare i componenti polisaccaridici.
  • Le glicosiltransferasi sono oggetto di studio per quanto riguarda il loro impiego nell'ingegnerizzazione della glicosilazione selettiva nell'intento di migliorare le proprietà terapeutiche di proteine e anticorpi e di ridurre l’immunogenicità dei tessuti xenogenici.

Per soddisfare ogni esigenza degli studi glicobiologici, proponiamo un’ampia gamma di prodotti per le analisi funzionali e strutturali dei glicani, inclusi enzimi che trasformano gli zuccheri, glicoproteine, proteoglicani, glicolipidi e oligosaccaridi liberi. Scopri il nostro assortimento di proteine deputate al riconoscimento dei glicani, incluse lectine e galectine, e gli enzimi carboidrati-attivi, tra cui esoglicosidasi, endoglicosidasi, glicosiltransferasi, e molto altro. Poiché la glicosilazione è una delle modificazioni post-traduzionali più frequenti e complesse, per semplicizzare e velocizzare la marcatura e l'analisi degli N-glicani e degli O-glicani delle glicoproteine, abbiamo sviluppato i kit GlycoProfile™.

Qui di seguito proponiamo reagenti, kit e risorse ancora più innovativi per la glicomica.


Kit per la deglicosilazione enzimatica di proteine

I nostri kit per la deglicosilazione enzimatica di proteine (come i prodotti EDEGLY e NDEGLY) contengono tutti gli enzimi e i reagenti necessari per rimuovere completamente dalle glicoproteine tutti i carboidrati legati con legami N-glicosidici (N-linked) e O-glicosidici (O-linked), comprese le glicoforme O-linked contenenti galattosio, N-acetilglucosammina e acido sialico. Altre caratteristiche e vantaggi:

  • deglicosilazione di ben 2 mg di glicoproteina, sufficienti per le successive procedure
  • una sola reazione a pH neutro – conservazione della struttura peptidica originale
  • nessuna degradazione delle proteine – è possibile condurre ricerche sulla struttura peptidica
  • esoglicosidasi incluse – attive sulle glicoforme O-linked
  • rimozione degli zuccheri O-linked contenenti acido sialico – analisi peptidiche più accurate
  • glicoproteine di controllo incluse – per garantire maggior sicurezza e riproducibilità

Kit GlycoProfile™ per N-deglicosilazione enzimatica in gel

Il kit GlycoProfile per N-deglicosilazione enzimatica in gel consente di rimuove efficacemente gli N-glicani e di digerire campioni proteici da gel di poliacrilammide 1D o 2D, preparandoli per la successiva analisi in MS o HPLC. Il kit è efficace con gel colorati con blu Coomassie, blu Coomassie colloidale e con argento, purché opportunamente decolorati. L’enzima glicolitico PNGasi F (peptide-N-glicosidasi F) offre prestazioni eccellenti se utilizzato per la deglicosilazione di N-glicani in gel di glicoproteine e glicopeptidi. La tripsina di grado proteomico digerisce efficacemente le proteine restanti. I campioni, dopo desalinizzazione, vengono concentrati per le successive analisi in MS, generalmente condotte con tecniche di ionizzazione MALDI o ESI ed analizzatore TOF o a quadrupolo. Questo kit offre diverse peculiarità e benefici come:

  • deglicosilazione e digestione in gel – minima manipolazione dei campioni
  • enzimi altamente purificati – si evitano attività e sottoprodotti indesiderati
  • basso contenuto di sali tampone – si evitano interferenze con le analisi in MS
  • reagente di decolorazione incluso – risparmio del tempo necessario per la preparazione

Altri enzimi per glicobiologia

A integrazione dei nostri kit di deglicosilazione, offriamo anche alcuni enzimi glicolitici per la rimozione o la parziale degradazione dei glicani. L’impiego di enzimi supplementari può risultare utile per alcune strutture di glicani che resistono alle strategie di deglicosilazione universali, ad esempio le strutture glicaniche che non vengono scisse dalla PNGasi F. Inoltre, per l'analisi della struttura e della funzione dei componenti glicanici, si può ricorrere all'idrolisi sequenziale di singoli monosaccaridi da glicani.





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