MAB3391
Anticorpo anti-collagene di tipo I, clone 5D8-G9
clone 5D8-G9, Chemicon®, from mouse
Sinonimo/i:
Anti-CAFYD, Anti-EDSARTH1, Anti-EDSC, Anti-OI1, Anti-OI2, Anti-OI3, Anti-OI4
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About This Item
Codice UNSPSC:
12352203
eCl@ss:
32160702
NACRES:
NA.41
Prodotti consigliati
Origine biologica
mouse
Livello qualitativo
Forma dell’anticorpo
purified immunoglobulin
Tipo di anticorpo
primary antibodies
Clone
5D8-G9, monoclonal
Reattività contro le specie
pig, canine, sheep, human, bovine
Non deve reagire con
guinea pig, ground squirrel, rat, kangaroo, horse, chicken, mouse
Produttore/marchio commerciale
Chemicon®
tecniche
ELISA: suitable
flow cytometry: suitable
immunohistochemistry: suitable
western blot: suitable
Isotipo
IgG1
N° accesso NCBI
N° accesso UniProt
Condizioni di spedizione
wet ice
modifica post-traduzionali bersaglio
unmodified
Informazioni sul gene
human ... COL1A1(1277)
Categorie correlate
Descrizione generale
Dal punto di vista evolutivo, il collagene è una proteina altamente conservata ed è caratterizzata dalla ripetizione di una tripletta “Glicina X Y” ininterrotta che è parte essenziale della struttura a doppia elica. Il collagene di tipo I (95 kDa) è presente nelle ossa, nella cornea e nei tendini. La presenza di mutazioni nel gene che lo codifica è associata a osteogenesi imperfetta, sindrome di Ehlers Danlos e osteoporosi idiopatica. Traslocazioni reciproche tra i cromosomi 17 e 22, dove risiede sia questo gene che quello per la subunità B del fattore di crescita derivato dalle piastrine, sono associate a un particolare tipo di tumore cutaneo chiamato dermatofibrosarcoma protuberans, derivante dalla mancata regolazione dell′espressione del fattore di crescita.
Specificità
L′anticorpo anti-collagene di tipo I è una IgG1 monoclonale che si lega a un epitopo in prossimità della regione C-terminale della proteina.
L′anticorpo anti-collagene di tipo I mostra alta affinità per il collagene di tipo I di origine umana, bovina e ovina. Non vi sono evidenze di reattività crociata con il collagene di tipo III, V e VI né con le proteine del tessuto connettivo. L′anticorpo reagisce solo con il collagene di tipo I nativo, non denaturato.
L′anticorpo anti-collagene di tipo I mostra alta affinità per il collagene di tipo I di origine umana, bovina e ovina. Non vi sono evidenze di reattività crociata con il collagene di tipo III, V e VI né con le proteine del tessuto connettivo. L′anticorpo reagisce solo con il collagene di tipo I nativo, non denaturato.
Applicazioni
Categoria di ricerca
Struttura cellulare
Struttura cellulare
ELISA: rivelazione di collagene di tipo I nativo. Cattura: 2-4 μg/mL; Rivelazione: l′anticorpo anti-collagene di tipo I alla concentrazione di 10μg/mL permette di rilevare 50 ng di collagene di tipo I umano senza alcuna reattività con altri tipi di collagene. Se la concentrazione di questo collagene è bassa, per la sua rivelazione potrebbero essere necessarie concentrazioni superiori di anticorpo. Si noti che l′anticorpo non si appaia con se stesso.
Immunoistochimica su sezioni congelate non fissate:
tagliare sezioni di spessore pari a 6 μm da campioni congelati usando un criomicrotomo. Lasciar asciugare bene all′aria. Reidratare con PBS. Per gli studi di IF non è necessario bloccare i siti aspecifici; se si usa la DAB, si consiglia il pretrattamento per la perossidasi e il blocco con BSA 2% in PBS per ridurre la colorazione del fondo.
Diluire l′anticorpo anti-collagene di tipo I in tampone PBS, aggiungerlo ai campioni e incubare per 60 minuti. (1:100-1:500).
Lavare due volte le sezioni per 10 minuti in PBS. Aggiungere l′anticorpo anti-topo coniugato con FITC e incubare per 60 minuti.
Lavare due volte per 10 minuti in PBS.
Montare le sezioni in glicerolo/acqua (9:1 v/v) contenente 1,4-fenilen-diammina 1 mM (per la stabilità della FITC) oppure usare i prodotti Chemicon N° Cat. 5096 o 5013.
NOTA:
studi preliminari suggeriscono che si può ottenere il potenziamento della colorazione in alcuni tessuti pretrattando (prima del passaggio 2) le sezioni con vari enzimi (ad es., pepsina 0,1% in HCl 0,1 M, 37°C per 5 minuti).
Citometria a flusso: 1:100
Immunoblotting: 1:1.000 utilizzando solo Western blot NATIVI, non ridotti né denaturati. Ramshaw, et.al (1988) "Electrophoretic and electroblotting of native collagens." Anal. Biochem. 168:82-87. L′anticorpo non funziona su Western blot ridotti tradizionali.
In breve, per la corsa elettroforetica dei collageni nativi si deve usare gel PAGE.
Un gel di separazione totale costituito da acrilammide al 3% (p/v), contenente bis-acrilammide al 3,2% (p/p) in proporzione al monomero come agente reticolante, in lattato di calcio 10mM, pH 6,8, viene fatto polimerizzare, tra due lastre di vetro posizionate verticalmente, con l′aggiunta di TEMED 0,05-0,1% TEMED e ammonio persolfato 0,05-0,1% (aggiunto da una soluzione madre al 10%). Il tampone del catodo (negativo) è Tris 50 mM corretto a pH 6,6 con acido lattico; il tampone dell′anodo (positivo) è acido lattico 0,1 M pH 2,5 {Friis, SJ et al, 1985 J Biochem Biophys Methods 10:301-306.}.
Prima di caricare i campioni, viene applicata corrente al gel per almeno 90 minuti a 100 V. I campioni di collagene sono dissolti alla concentrazione di 1 mg/mL in acido lattico 0,1 M o acido acetico 0,1M contenente saccarosio 10% e ne vengono caricati 5-10μg per corsia. Per favorire il caricamento dei campioni si aggiunge verde metile. L′elettroforesi avviene a 70 V per 5 ore a temperatura ambiente.
Il blotting avviene in acido lattico 0,1 M, pH 2,5, e a 20 V a temperatura ambiente per 16 ore, durante le quali il collagene migra verso il catodo.
Immunoistochimica su sezioni congelate non fissate:
tagliare sezioni di spessore pari a 6 μm da campioni congelati usando un criomicrotomo. Lasciar asciugare bene all′aria. Reidratare con PBS. Per gli studi di IF non è necessario bloccare i siti aspecifici; se si usa la DAB, si consiglia il pretrattamento per la perossidasi e il blocco con BSA 2% in PBS per ridurre la colorazione del fondo.
Diluire l′anticorpo anti-collagene di tipo I in tampone PBS, aggiungerlo ai campioni e incubare per 60 minuti. (1:100-1:500).
Lavare due volte le sezioni per 10 minuti in PBS. Aggiungere l′anticorpo anti-topo coniugato con FITC e incubare per 60 minuti.
Lavare due volte per 10 minuti in PBS.
Montare le sezioni in glicerolo/acqua (9:1 v/v) contenente 1,4-fenilen-diammina 1 mM (per la stabilità della FITC) oppure usare i prodotti Chemicon N° Cat. 5096 o 5013.
NOTA:
studi preliminari suggeriscono che si può ottenere il potenziamento della colorazione in alcuni tessuti pretrattando (prima del passaggio 2) le sezioni con vari enzimi (ad es., pepsina 0,1% in HCl 0,1 M, 37°C per 5 minuti).
Citometria a flusso: 1:100
Immunoblotting: 1:1.000 utilizzando solo Western blot NATIVI, non ridotti né denaturati. Ramshaw, et.al (1988) "Electrophoretic and electroblotting of native collagens." Anal. Biochem. 168:82-87. L′anticorpo non funziona su Western blot ridotti tradizionali.
In breve, per la corsa elettroforetica dei collageni nativi si deve usare gel PAGE.
Un gel di separazione totale costituito da acrilammide al 3% (p/v), contenente bis-acrilammide al 3,2% (p/p) in proporzione al monomero come agente reticolante, in lattato di calcio 10mM, pH 6,8, viene fatto polimerizzare, tra due lastre di vetro posizionate verticalmente, con l′aggiunta di TEMED 0,05-0,1% TEMED e ammonio persolfato 0,05-0,1% (aggiunto da una soluzione madre al 10%). Il tampone del catodo (negativo) è Tris 50 mM corretto a pH 6,6 con acido lattico; il tampone dell′anodo (positivo) è acido lattico 0,1 M pH 2,5 {Friis, SJ et al, 1985 J Biochem Biophys Methods 10:301-306.}.
Prima di caricare i campioni, viene applicata corrente al gel per almeno 90 minuti a 100 V. I campioni di collagene sono dissolti alla concentrazione di 1 mg/mL in acido lattico 0,1 M o acido acetico 0,1M contenente saccarosio 10% e ne vengono caricati 5-10μg per corsia. Per favorire il caricamento dei campioni si aggiunge verde metile. L′elettroforesi avviene a 70 V per 5 ore a temperatura ambiente.
Il blotting avviene in acido lattico 0,1 M, pH 2,5, e a 20 V a temperatura ambiente per 16 ore, durante le quali il collagene migra verso il catodo.
Questo anticorpo anti-collagene di tipo I, clone 5D8-G9, è convalidato per l′uso nei saggi di ELISA, FC, WB e IH per la rivelazione del collagene di tipo I.
Sottocategoria di ricerca
Proteine dell′ECM
Proteine dell′ECM
Stato fisico
100μg di anticorpo purificato alla concentrazione di 1 mg/mL in Tris acetato 50 mM, NaCl 150 mM, Bronidox 0,1% (pH 5,5).
La frazione immunoglobulinica è stata purificata mediante cromatografia con proteina A ed è risultata >95% pura alla PAGE con coomassie. L′anticorpo anti-collagene di tipo I è fornito filtrato attraverso pori da 0,22 micron.
La frazione immunoglobulinica è stata purificata mediante cromatografia con proteina A ed è risultata >95% pura alla PAGE con coomassie. L′anticorpo anti-collagene di tipo I è fornito filtrato attraverso pori da 0,22 micron.
Formato: purificata
Stoccaggio e stabilità
L′anticorpo anti-collagene di tipo I è spedito in forma liquida a temperatura ambiente. Questo materiale è stabile per un massimo di 6 mesi quando conservato a 2-8°C.
AVVERTENZA: La soluzione dell′anticorpo monoclonale contiene azoturo di sodio 0,1% come conservante. A causa dei potenziali pericoli rappresentati dall′accumulo di questo materiale nelle tubature di scarico, i reagenti esausti vanno smaltiti con grandi volumi d′acqua.
AVVERTENZA: La soluzione dell′anticorpo monoclonale contiene azoturo di sodio 0,1% come conservante. A causa dei potenziali pericoli rappresentati dall′accumulo di questo materiale nelle tubature di scarico, i reagenti esausti vanno smaltiti con grandi volumi d′acqua.
Risultati analitici
Controllo
Lisato di tessuto renale umano.
Lisato di tessuto renale umano.
Note legali
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Esclusione di responsabilità
Salvo diversa indicazione nel nostro catalogo o in altra documentazione fornita dall′azienda insieme al prodotto, i nostri prodotti sono destinati esclusivamente a scopi di ricerca e non devono essere utilizzati per altre finalità, inclusi a titolo esemplificativo ma non esaustivo, fini commerciali non autorizzati, applicazioni diagnostiche in vitro, usi terapeutici ex vivo o in vivo o qualsiasi altro tipo di assunzione o applicazione rivolta agli esseri umani o agli animali.
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Codice della classe di stoccaggio
12 - Non Combustible Liquids
Classe di pericolosità dell'acqua (WGK)
WGK 2
Punto d’infiammabilità (°F)
Not applicable
Punto d’infiammabilità (°C)
Not applicable
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Il team dei nostri ricercatori vanta grande esperienza in tutte le aree della ricerca quali Life Science, scienza dei materiali, sintesi chimica, cromatografia, discipline analitiche, ecc..
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