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形狀
liquid
包裝
vial of 50 μL
濃度
20 ng/μL in TE buffer; DNA (1μg of purified plasmid DNA)
技術
microbiological culture: suitable
應用
CRISPR
genome editing
啟動子
Promoter name: AraBAD
Promoter activity: inducible
運輸包裝
dry ice
儲存溫度
−20°C
一般說明
最近在大肠杆菌中使用 CRISPR/Cas9 介导的重组工程技术的论文宣称编辑效率接近 100%，这使得 CRISPR/Cas9 介导的重组工程技术成为迄今为止最强大的细菌基因组工程方法。此外，Cas9 介导的重组工程克服了对第二个重组步骤的依赖，避免了不稳定疤痕位点的产生，可用于多重操作，并且比以前的方案耗时更少。
在这里，我们推出一种新型双载体 CRISPR/Cas 介导的λ -Red 系统，用于改进大肠杆菌的重组工程。我们的系统可以促进由 Cas9 核酸内切酶产生的 DSB 的同源定向修复（homology-directed repair），从而通过供体 DNA 的染色体整合实现遗传变异。
该质粒应与定制 gRNA （CRISPRBACD）一起使用，该定制 gRNA 可通过我们的定制 gRNA 设计工具进行设计和订购。供体可以是 ssDNA 或 dsDNA，其同源臂分别为 45-59 或 150-500 个核苷酸。供体设计方案参见技术通告。
用于大肠杆菌的 Cas9 Lambda Red 同源重组质粒 （CAS9BAC1P） 包含从其天然启动子表达的来自酿脓链球菌 (spCas9) 的 Cas9 基因，以及在阿拉伯糖诱导型 ParaB 启动子的控制下的λ-red 重组酶 exo、beta 和 gam。该质粒具有卡那霉素抗性并具有 repA101ts 温度敏感型复制起点，便于质粒维护和消除。
在这里，我们推出一种新型双载体 CRISPR/Cas 介导的λ -Red 系统，用于改进大肠杆菌的重组工程。我们的系统可以促进由 Cas9 核酸内切酶产生的 DSB 的同源定向修复（homology-directed repair），从而通过供体 DNA 的染色体整合实现遗传变异。
该质粒应与定制 gRNA （CRISPRBACD）一起使用，该定制 gRNA 可通过我们的定制 gRNA 设计工具进行设计和订购。供体可以是 ssDNA 或 dsDNA，其同源臂分别为 45-59 或 150-500 个核苷酸。供体设计方案参见技术通告。
用于大肠杆菌的 Cas9 Lambda Red 同源重组质粒 （CAS9BAC1P） 包含从其天然启动子表达的来自酿脓链球菌 (spCas9) 的 Cas9 基因，以及在阿拉伯糖诱导型 ParaB 启动子的控制下的λ-red 重组酶 exo、beta 和 gam。该质粒具有卡那霉素抗性并具有 repA101ts 温度敏感型复制起点，便于质粒维护和消除。
應用
细菌基因组编辑
菌株优化
- 用于突变或 SNP 分析的 HR 介导的重组工程
- 通过整合到内源基因中的启动子、融合标签或报告基因创造HR介导的基因敲入细胞系
- 在大肠杆菌细胞系中创建基因敲除
菌株优化
特點和優勢
高效：将 HR 介导的整合效率提高到将近100%
无标记：不需要抗生素抗性标记插入
无疤痕：标记切除没有疤痕序列，其通常会导致脱靶重组
多重操作：一次可以使用多个自定义 gRNA 序列
无标记：不需要抗生素抗性标记插入
无疤痕：标记切除没有疤痕序列，其通常会导致脱靶重组
多重操作：一次可以使用多个自定义 gRNA 序列
原則
CRISPR/Cas被细菌和古细菌用作防御入侵病毒和质粒的防御系统。最近，来源于 化脓性链球菌 的II型CRISPR/Cas系统已被设计为在系统中发挥作用，其使用两种分子组分：单一Cas9蛋白和非编码向导RNA（gRNA）。可以通过单个或双gRNA对Cas9内切核酸酶进行编程，从而将DNA双链断裂（DSB）导向所需的基因组位置。基于核酸酶的方法在用作微生物基因编辑工具时具有很大的毒性，因为许多细菌缺乏真核系统中存在的必需的 DNA 修复机制。然而，当用CRISPR/Cas9 介导重组工程时，这种细胞毒性性质带来了一个优势，即 Cas9 诱导的双链断裂会杀死不与供体 DNA 重组的细胞。这为无痕基因编辑（markerless, scarless gene editing）提供了一种固有的选择方法，与传统方法相比，该方法显著提高了效率并且更易于进行多重检测。大肠杆菌 HR Cas9 质粒（货号 CAS9BAC1P)包含从其天然启动子表达的来自化脓链球菌(spCas9)的 Cas9 基因，以及在阿拉伯糖诱导型 ParaB 启动子的控制下的λred 重组酶 exo、beta 和 gam 基因。该质粒具有氨苄青霉素抗性并具有 repA101ts 温度敏感型复制起点，便于质粒维护和消除。
法律資訊
儲存類別代碼
12 - Non Combustible Liquids
水污染物質分類（WGK）
WGK 2
閃點（°F）
Not applicable
閃點（°C）
Not applicable
Yifan Li et al.
Metabolic engineering, 31, 13-21 (2015-07-05)
Engineering cellular metabolism for improved production of valuable chemicals requires extensive modulation of bacterial genome to explore complex genetic spaces. Here, we report the development of a CRISPR-Cas9 based method for iterative genome editing and metabolic engineering of Escherichia coli.
Michael E Pyne et al.
Applied and environmental microbiology, 81(15), 5103-5114 (2015-05-24)
To date, most genetic engineering approaches coupling the type II Streptococcus pyogenes clustered regularly interspaced short palindromic repeat (CRISPR)/Cas9 system to lambda Red recombineering have involved minor single nucleotide mutations. Here we show that procedures for carrying out more complex
商品
In this article, we present an application of our novel E. coli CRISPR/Cas-mediated Lambda-Red (λ-Red) homologous recombination (HR) vector system, which facilitates gene editing through the homology-directed repair (HDR) of double-stranded DNA breaks (DSBs) created by Cas9 endonuclease, using either ssDNA or dsDNA as an editing template.
我们的科学家团队拥有各种研究领域经验，包括生命科学、材料科学、化学合成、色谱、分析及许多其他领域.
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