CAS9P

Cas9 质粒

• 分類程式碼代碼: 12352200
• NACRES: NA.51

属性

• 重組細胞: expressed in E. coli
• 品質等級: 200
• 包裝: vial of 50 μL
• 濃度: 20 ng/μL in TE buffer; DNA (1μg of plasmid DNA)
• 啟動子: Promoter name: CMV
• 選擇: kanamycin
• 運輸包裝: dry ice
• 儲存溫度: −20°C

说明

一般說明

Cas9表达质粒使用CMV启动子实现Cas9强瞬时表达。您可以使用MluI和NheI酶切将CMV替换为其它启动子。而且还可使用XbaI酶切将Cas9表达质粒线性化，以实现基于T7的mRNA表达。

應用

功能性基因组学/靶点验证

• 在多种细胞系中进行基因敲除
• 对不适合于RNAi的基因进行完全敲除
• 建立基因敲入细胞系，将启动子、融合标签或报告基因整合到内源性基因中

成分

1管含1µg 的Cas9质粒。

请注意，该产品不含向导RNA序列。向导RNA必须通过定制CRISPR产品选项卡单独购买。

原則

CRISPR/Cas是细菌和古细菌的一种防御系统，可用来对抗入侵的病毒和质粒。来自酿脓链球菌的II型CRISPR/Cas系统包含两种分子元件，即一个Cas9蛋白和一个非编码向导RNA（gRNA），该系统经过基因改造而被用于真核系统中。Cas9核酸内切酶可在单个gRNA的引导下，在指定基因组位置上引入DNA双链断裂（DSB）。与锌指核酸酶（ZFN）诱导的DSB相似，细胞随后会激活内源性DNA修复程序，即非同源性末端接合（NHEJ）或同源重组修复机制（HDR），对目标DSB进行修复。

外觀

Sigma Cas9 质粒DNA的产品形式是浓度为20ng/μl的50μl溶液。

準備報告

Sigma CRISPR质粒产品为小量提取包装，可能不适用于转染到特殊类型的细胞中。为得到最佳结果，我们建议在转染前使用无内毒素的DNA纯化试剂盒大量提取质粒。

其他說明

为了介导DNA双链断裂，必须与U6-gRNA质粒一起使用。

文献中使用的标准转染浓度范围为≥1.0 ug/μl且≤5 uL的Cas9质粒结合≥1.0 ug/μl且≤5 ul的U6-gRNA质粒。（上述所有浓度均假设是对0.5~1百万个细胞进行核转染）

法律資訊

CRISPR 使用许可协议

安全信息

• 儲存類別代碼: 10 - Combustible liquids
• 水污染物質分類（WGK）: nwg
• 閃點（°F）: Not applicable
• 閃點（°C）: Not applicable