2GRHSRMKB

Mezcla lista para usar KAPA2G Robust de inicio en caliente

2 × ( contains 2 mM MgCl₂ at 1×)

• Sinónimos: PCR, PCR de inicio de caliente
• Código UNSPSC: 41106300
• NACRES: NA.55

Propiedades

• uso: sufficient for 100 reactions; sufficient for 500 reactions
• Nivel de calidad: 100
• caducidad: ≤12 mo.
• Características: Difficult Templates/Specialty Enzymes PCR; dNTPs included; hotstart
• envase: kit of 1.25 mL (100 x 25 μL rxn; KK5701); kit of 6.25 mL (500 x 25 μL rxn; KK5702)
• fabricante / nombre comercial: Roche
• concentración: 2 × ( contains 2 mM MgCl₂ at 1×)
• técnicas: PCR: suitable
• entrada: crude DNA
• temp. de almacenamiento: −20°C

Descripción

Descripción general

La segunda generación de la ADN polimerasa KAPA2G Robust evolucionó para resolver amplificaciones no uniformes a lo largo de una amplia gama de tipos de amplicones (ricos en GC y en AT). La mezcla KAPA2G Robust HotStart^® ReadyMix^™ permite una mayor procesividad y actividad específica, lo que se traduce en un rendimiento robusto de la PCR, una elevada sensibilidad y una mayor tolerancia a inhibidores comunes. El gran rendimiento de la ADN polimerasa KAPA2G Robust es idealmente adecuado para aplicaciones de PCR complejas y muestras difíciles, al eliminar la necesidad de optimización mediante el empleo de múltiples enzimas y protocolos.

Aplicación

La mezcla lista para usar KAPA2G Robust HotStart^® ReadyMix^™ se ha utilizado para:

• la amplificación de plantillas ricas GC o AT
• la amplificación de plantillas que contienen inhibidores comunes de la la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), por ejemplo, sales, urea, SDS o etanol
• muestra de PCR sin procesar, por ejemplo, hisopos bucales, células bacterianas, de levaduras o mamíferos cultivadas
• PCR de colonias
• extracción y amplificación de ADN
• detección de mutaciones
• amplificación con PCR específica de metilación (MSP)
• genotipado-PCR
• secuenciación basada en PCR

Acciones bioquímicas o fisiológicas

Los fragmentos de ADN generados con la ADN polimerasa KAPA2G Robust HotStart^® tienen las mismas características que los fragmentos de ADN producidos con la ADN polimerasa Taq de tipo natural y pueden utilizarse para rutinas de para análisis o aplicaciones posteriores habituales, como la digestión con enzimas de restricción, la clonación y la secuenciación. Igual que la Taq natural, la KAPA2G Robust HotStart tiene actividades 5′→3′ polimerasa′ y 5′→3′ exonucleasa, pero no actividad 3′→5′ exonucleasa (corrección de errores). La fidelidad de la KAPA2G Robust HotStart es similar a la de la Taq natural; tiene una tasa de error de aproximadamente 1 error por cada 1,7 x 10 5 nucleótidos incorporados. Los productos de la PCR generados con la KAPA2G Robust HotStart tienen una cola de 3′-dA y pueden clonarse en vectores de clonación TA.

Características y beneficios

Amplificación eficiente de muestras ricas en GC y AT

• Eficiencia robusta a través de una amplia variedad de plantillas ricas en GC y AT
• Mayor tasa de éxito de la PCR

Mayor tolerancia a los inhibidores comunes de la PCR

• Amplificación eficiente de muestras sin procesar
• Mayores rendimiento y sensibilidad por unidad de enzima

Rendimiento sin igual en la PCR de colonias

• Mayores rendimientos y mayor uniformidad de la PCR directa de células de E. coli y levadura

Notas rápidas:

• Los kits para PCR KAPA2G Robust HotStart ReadyMix contienen la ADN polimerasa KAPA2G Robust diseñada mediante ingeniería genética para una elevada procesividad y tolerancia a inhibidores.
• Pueden utilizarse como plantillas muestras de ADN genómico purificadas y muestras sin procesar (por ejemplo, PCR de colonias).
• Utilice un tiempo de extensión de 15 segundo/kb por ciclo y aumente a 30-60segundos/kb para amplicones o plantillas difíciles.
• La mezcla de reacción KAPA2G Robust HotStart ReadyMix contiene MgCl₂ 2 mM a concentración 1X.
• La mezcla KAPA2G Robust HotStart ReadyMix con colorante incluye dos colorantes de seguimiento inertes para permitir la carga directa en geles de agarosa.
• La mezcla KAPA2G Robust HotStart ReadyMix es ideal para PCR de protocolo único, es decir, amplificación de fragmentos que van del 65 al 25% de GC, hasta 1 kb de tamaño, utilizando una configuración y protocolo de ciclado de reacción única.
• Los productos de reacción tienen una cola de 3′-dA y pueden clonarse en vectores de clonación TA.

Calidad

Se confirma que cada lote de ADN polimerasa KAPA2G Robust HotStart contiene <2 % de proteínas contaminantes (valoración Agilent Protein 230). Los kits para PCR KAPA2G Robust HotStart ReadyMix están sometidos a estrictas pruebas de control de calidad, carecen de actividad exonucleasa y endonucleasa contaminante y cumplen estrictos requisitos con respecto a los niveles de contaminación del ADN.

Nota de preparación

Asegurarse siempre de que el producto se ha descongelado por completo y se ha mezclado bien antes de su uso. Los reactivos pueden conservarse a 4°C durante poco tiempo (hasta 1 mes). Para un almacenamiento prolongado, retornar a -20°C. Siempre que todos los componentes se hayan manipulado con cuidado y no se hayan contaminado, no cabe esperar que el kit se altere si se deja (accidentalmente) a temperatura ambiente un breve espacio de tiempo (hasta 3 días). No se recomienda su conservación a largo plazo a temperatura ambiente y 4°C. Tenga en cuenta que los reactivos conservados por encima de -20°C son más propensos a la degradación cuando se contaminan durante su uso y, por consiguiente, la conservación a esas temperaturas es por cuenta y riesgo del propio usuario.

Otras notas

Para uso exclusivo en investigación. No indicado para procedimientos diagnósticos.

Información legal

HOTSTART is a registered trademark of Molecular BioProducts, Inc.

ReadyMix is a trademark of Sigma-Aldrich Co. LLC

Solo componentes del kit

• KAPA2G Robust HotStart^® DNA Polymerase 1U per 25 µL reaction
• MgCl₂ 2mM at 1X
• dNTP Mix 0.2 mM of each dNTP at 1X

Información de seguridad

• Pictogramas: GHS07,GHS08
• Palabra de señalización: Warning
• Frases de peligro: H302,H371
• Consejos de prudencia: P260 - P264 - P270 - P301 + P312 + P330 - P308 + P311 - P501
• Clasificaciones de peligro: Acute Tox. 4 Oral - STOT SE 2
• Código de clase de almacenamiento: 12 - Non Combustible Liquids
• Clase de riesgo para el agua (WGK): WGK 1
• Punto de inflamabilidad (°F): does not flash
• Punto de inflamabilidad (°C): does not flash