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Mezcla lista para usar de inicio en caliente KAPA2G Fast

2 ×

• Sinónimos: PCR, PCR de inicio de caliente
• Código UNSPSC: 41106300
• NACRES: NA.55

Propiedades

• uso: sufficient for 100 reactions; sufficient for 500 reactions
• Nivel de calidad: 100
• caducidad: ≤18 mo.
• Características: Fast PCR; Multiplex PCR; dNTPs included; hotstart
• envase: kit of 1.25 mL (100 x 25 μL rxn; KK5603); kit of 6.25 mL (500 x 25 μL rxn; KK5601)
• fabricante / nombre comercial: Roche
• concentración: 2 ×
• técnicas: PCR: suitable
• entrada: purified DNA
• temp. de almacenamiento: −20°C

Descripción

Descripción general

La ADN polimerasa KAPA2G Fast es una enzima biotecnológica de segunda generación (2G) diseñada para conseguir una procesividad y velocidad mayores, ofreciendo tasas de extensión significativamente más rápidas que la polimerasa Taq natural. Además de la velocidad, la KAPA2G Fast proporciona un rendimiento y una sensibilidad superiores a las manifestadas por las enzimas de la competencia en una amplia variedad de muestras.
Los kits de ADN polimerasa KAPA2G Fast están diseñados para una PCR rápida, en la que los tiempos de reacción totales son un 20-70 % más cortos que los de las PCR convencionales realizadas con la ADN polimerasa Taq natural. Esto puede conseguirse sin sacrificar el rendimiento de la reacción y no requiere fungibles ni termocicladores especializados para PCR.
La ADN polimerasa KAPA2G Fast HotStart^® se suministra en un práctico formato de mezcla lista para utilizar ReadyMix 2X que contiene todos los componentes de la reacción excepto los cebadores y la plantilla.

Aplicación

La mezcla lista para usar de inicio en caliente KAPA2G Fast HotStart^® ReadyMix^™ se ha utilizado para:

• PCR habitual
• PCR rápida
• reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa (RT- PCR)
• Genotipado y PCR fluorescente

Acciones bioquímicas o fisiológicas

Los fragmentos de ADN generado por la ADN polimerasa KAPA2G Fast HotStart^® pueden utilizarse en análisis o aplicaciones sistemáticos posteriores, como la digestión mediante enzimas de restricción, la clonación y la secuenciación. Igual que la Taq natural, la KAPA2G Fast tiene actividades 5′→3 polimerasa′ y 5′→3′ exonucleasa, pero no actividad 3′→5′ exonucleasa (corrección de errores). La fidelidad de la KAPA2G Fast es similar a la de la Taq natural; tiene una tasa de error de aproximadamente 1 error por cada 1,7 x 10⁵ nucleótidos incorporados.

Características y beneficios

Reduce los tiempos de ciclado en hasta un 75 %:

• Tiempos de extensión de tan sólo 1 segundo por kilobase
• Amplia cobertura de plantillas ricas en AT y en GC.

Alta velocidad, mayor rendimiento:

• Sensibilidad de copia única de muestras complejas
• Mayor producción

Notas rápidas:

• Los kits para PCR KAPA2G Fast HotStart ReadyMix contienen la ADN polimerasa de inicio en caliente KAPA2G Fast diseñada para una PCR rápida.
• Utilice un tiempo de extensión de 1 segundo para amplicones de <1 kb y 15 segundos/kb para amplicones más largos, y ahorre entre un 20 y un 70 % de tiempo de reacción total.
• Sin necesidad de equipos ni fungibles de PCR especializados.
• El sistema amortiguador optimizado ofrece mejores rendimientos, especificidad y sensibilidad, facilitando una hibridación eficiente del cebador en una amplia variedad de longitudes de cebador, contenido de GC y temperaturas de fusión.
• Para una elevada eficiencia de reacción, no deben superarse los volúmenes de reacción de 25 μl.
• La mezcla de reacción KAPA2G Fast HotStart ReadyMix contiene MgCl₂ 1,5 mM a concentración X1.
• La mezcla KAPA2G Fast HotStart ReadyMix con colorante incluye dos colorantes de seguimiento inertes que permiten la carga directa en geles de agarosa. Los productos de reacción tienen una cola de 3′-dA y pueden clonarse en vectores de clonado TA.

Calidad

Se confirma que cada lote de ADN polimerasa KAPA2G Fast contiene <2 % de proteínas contaminantes (valoración Agilent Protein 230). La mezcla lista para usar KAPA2G Fast ReadyMix está sometida a estrictas pruebas de control de calidad, carece de actividad exonucleasa y endonucleasa contaminante y cumple estrictos requisitos con respecto a los niveles de contaminación por ADN.

Nota de preparación

Asegurarse siempre de que el producto se ha descongelado por completo y se ha mezclado bien antes de su uso. Los reactivos pueden conservarse a 4°C durante poco tiempo (hasta 1 mes). Para un almacenamiento prolongado, retornar a -20°C. Siempre que todos los componentes se hayan manipulado con cuidado y no se hayan contaminado, no cabe esperar que el kit se altere si se deja (accidentalmente) a temperatura ambiente un breve espacio de tiempo (hasta 3 días). No se recomienda su conservación prolongada a temperatura ambiente y a 4°C. Tenga en cuenta que los reactivos conservados por encima de -20°C son más propensos a la degradación cuando se contaminan durante su uso y, por consiguiente, la conservación a esas temperaturas es por cuenta y riesgo del usuario.

Otras notas

Para uso exclusivo en investigación. No indicado para procedimientos diagnósticos.

Información legal

HOTSTART is a registered trademark of Molecular BioProducts, Inc.

ReadyMix is a trademark of Sigma-Aldrich Co. LLC

Solo componentes del kit

• KAPA2G Fast HotStart^® DNA Polymerase 0.5 U per 25 µL reaction
• MgCl₂ 1.5mM at 1X
• dNTP Mix 0.2 mM of each dNTP at 1X

Información de seguridad

• Pictogramas: GHS08
• Palabra de señalización: Warning
• Frases de peligro: H371
• Consejos de prudencia: P260 - P264 - P270 - P308 + P311 - P405 - P501
• Clasificaciones de peligro: STOT SE 2
• Código de clase de almacenamiento: 12 - Non Combustible Liquids
• Clase de riesgo para el agua (WGK): WGK 1
• Punto de inflamabilidad (°F): does not flash
• Punto de inflamabilidad (°C): does not flash