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Kit para PCR de inicio en caliente KAPA2G Robust

with dNTPs

• Sinónimos: PCR, PCR de inicio de caliente
• Código UNSPSC: 41106300
• NACRES: NA.55

Propiedades

• Nivel de calidad: 100
• uso: sufficient for 1000 reactions; sufficient for 200 reactions; sufficient for 500 reactions
• caducidad: ≤12 mo.
• Características: Difficult Templates/Specialty Enzymes PCR; dNTPs included; hotstart
• envase: pkg of 100 U (KK5532); pkg of 250 U (KK5516); pkg of 500 U (KK5518)
• fabricante / nombre comercial: Roche
• técnicas: PCR: suitable
• entrada: crude DNA
• temp. de almacenamiento: −20°C

Descripción

Descripción general

La segunda generación de ADN polimerasa KAPA2G Robust evolucionó para resolver la amplificación no uniforme a lo largo de una amplia gama de tipos de amplicones (ricos en GC y en AT). Este producto permite una mayor procesividad y actividad específica, lo que se traduce en un rendimiento robusto de la PCR, elevada sensibilidad y mayor tolerancia a inhibidores comunes. El elevado rendimiento de la ADN polimerasa KAPA2G Robust es idealmente adecuado para aplicaciones complejas de la PCR y muestras difíciles, eliminando la necesidad de optimización utilizando múltiples enzimas y protocolos.

Aplicación

El kit para PCR KAPA2G Robust HotStart^® se ha utilizado para:

• Amplificación de plantillas ricas GC o en AT
• Muestras que contienen inhibidores comunes de la PCR, por ejemplo sales, urea, SDS o etanol
• Muestra de PCR sin procesar, por ejemplo, hisopos bucales, células bacterianas, de levaduras o mamíferos cultivadas
• PCR de colonias
• qPCR
• Amplificación de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) anidada
• Amplificación de dianas de ADN en PCR
• Amplificación de ADN mediante PCR convencional
• PCR habitual

Acciones bioquímicas o fisiológicas

Los fragmentos de ADN creados con la ADN polimerasa KAPA2G Robust HotStart^® tienen las mismas características que los fragmentos de ADN generados con la ADN polimerasa Taq natural. Puede utilizarse para aplicaciones sistemáticas posteriores, como digestión con enzimas de restricción, clonación y secuenciación. Igual que la Taq natural, la KAPA2G Robust HotStart tiene actividades 5′→3′ polimerasa y 5′→3′ exonucleasa, pero está desprovista de actividad 3′→5′ exonucleasa (corrección de errores). La fidelidad de la KAPA2G Robust HotStart es similar a la de la Taq natural. Muestra una tasa de error de aproximadamente 1 error por cada 1,7 x 10⁵ nucleótidos incorporados.

Características y beneficios

Amplificación eficiente de muestras ricas en GC y AT

• Eficiencia robusta a través de una amplia variedad de plantillas ricas en GC y AT
• Mayor tasa de éxito de la PCR

Mayor tolerancia a los inhibidores comunes de la PCR

• Amplificación eficiente de muestras sin procesar
• Mayores rendimiento y sensibilidad por unidad de enzima

Rendimiento sin igual en la PCR de colonias

• Mayores rendimientos y mayor uniformidad de la PCR directa de células de E. coli y levadura

Notas rápidas:

• Los kits para PCR KAPA2G Robust HotStart^® con dNTP contienen la ADN polimerasa de inicio en caliente KAPA2G Robust biotecnológica diseñada para exhibir una elevada procesividad y tolerancia a inhibidores.
• Pueden utilizarse como plantillas muestras de ADN genómico purificadas y muestras sin procesar (por ejemplo, PCR de colonias).
• Utilice 0,5 U ADN polimerasa de inicio en caliente KAPA2G Robust por 25 μl de reacción.. Las PCR más complejas (muestras sin procesar, rica en GC) pueden requerir concentraciones más elevadas de la enzima.
• Utilice un tiempo de extensión de 15 segundos/kb por ciclo y aumente a 30-60 segundos/kb para amplicones o plantillas difíciles.
• Contiene disoluciones tampón KAPA2G 1,5 mM MgCl₂ a 1X.
• Puede añadirse más MgCl₂ utilizando la disolución de MgCl₂ 25 mM suministrado en el kit.
• El tampón KAPA2G A está optimizado para mayores rendimiento, especificidad y sensibilidad.
• El tampón KAPA2G B se recomienda para muestras de plantillas contaminadas con inhibidor.
• El tampón KAPA2G GC se recomienda para una PCR rica en GC (>70 % de GC).
• El intensificador KAPA 1 puede utilizarse con el tampón KAPA2G A o B, particularmente para los análisis ricos en GC.
• Los productos de reacción tienen una cola de 3′-dA y pueden clonarse en vectores de clonado TA.

Calidad

Se confirma que cada lote de ADN polimerasa KAPA2G Robust HotStart contiene <2 % de proteínas contaminantes (valoración Agilent Protein 230). Los kits para PCR KAPA2G Robust HotStart están sometidos a estrictas pruebas de control de calidad, carecen de actividad exonucleasa y endonucleasa contaminante y cumplen estrictos requisitos con respecto a los niveles de contaminación del ADN.

Nota de preparación

Asegurarse siempre de que el producto se ha descongelado por completo y se ha mezclado bien antes de su uso. Los reactivos pueden conservarse a 4°C durante poco tiempo (hasta 1 mes). Para un almacenamiento prolongado, retornar a -20°C. Siempre que todos los componentes se hayan manipulado con cuidado y no se hayan contaminado, no cabe esperar que el kit se altere si se deja (accidentalmente) a temperatura ambiente un breve espacio de tiempo (hasta 3 días). No se recomienda su conservación a largo plazo a temperatura ambiente y 4°C. Tenga en cuenta que los reactivos conservados por encima de -20°C son más propensos a la degradación cuando se contaminan durante su uso y, por consiguiente, la conservación a esas temperaturas es por cuenta y riesgo del propio usuario.

Otras notas

Para uso exclusivo en investigación. No indicado para procedimientos diagnósticos.

Información legal

HOTSTART is a registered trademark of Molecular BioProducts, Inc.

Solo componentes del kit

• KAPA2G Robust HotStart^® DNA Polymerase 5 U/µL
• 5X KAPA2G Buffer A
• 5X KAPA2G Buffer B
• 5X KAPA2G GC Buffer
• 5X KAPA Enhancer 1
• KAPA MgCl₂ 25 mM
• KAPA dNTP Mix 10 mM each

Información de seguridad

• Pictogramas: GHS07,GHS08
• Palabra de señalización: Warning
• Frases de peligro: H302,H371,H412
• Consejos de prudencia: P260 - P264 - P270 - P273 - P308 + P311 - P501
• Clasificaciones de peligro: Acute Tox. 4 Oral - Aquatic Chronic 3 - STOT SE 2
• Código de clase de almacenamiento: 12 - Non Combustible Liquids
• Clase de riesgo para el agua (WGK): WGK 1
• Punto de inflamabilidad (°F): does not flash
• Punto de inflamabilidad (°C): does not flash