P8250
Perossidasi
Type II, essentially salt-free, lyophilized powder, 150-250 units/mg solid (using pyrogallol)
Sinonimo/i:
Donatore: idrogeno-perossido ossidoreduttasi, Perossidasi di rafano
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About This Item
Prodotti consigliati
Origine biologica
horseradish
Livello qualitativo
Tipo
Type II
Forma fisica
essentially salt-free, lyophilized powder
Attività specifica
150-250 units/mg solid (using pyrogallol)
PM
~44 kDa
Solubilità
0.1 M phosphate buffer: soluble (pH 6.0)
H2O: soluble
Rapporto di assorbanza
RZ ≥1.8
applicazioni
diagnostic assay manufacturing
Temperatura di conservazione
2-8°C
InChI
1S/H2O3/c1-3-2/h1-2H
JSPLKZUTYZBBKA-UHFFFAOYSA-N
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Descrizione generale
La perossidasi di rafano si isola dalle radici del rafano (Amoracia rusticana) e appartiene al gruppo delle perossidasi con ferroprotoporfirina. L′HRP è un polipeptide a singola catena che contiene quattro ponti disolfuro. È una glicoproteina che contiene il 18% di carboidrati. La composizione dei carboidrati include galattosio, arabinosio, xilosio, fucosio, mannosio, mannosamina e galattosamina, a seconda del singolo isozima. Il peso molecolare (circa 44 kDa) include la catena polipeptidica (33.890 Dalton), la emina con Ca2+ (circa 700 Dalton) e il carboidrato (circa 9.400 Dalton). Esistono almeno sette isoenzimi di HRP. Il punto isoelettrico degli isoenzimi della perossidasi di rafano è compreso fra 3,0 e 9,0.
Applicazioni
Horseradish peroxidase (HRP) is isolated from horseradish roots (Amoracia rusticana). It is used in biochemistry applications such as western blots, ELISA and Immunohistochemistry. Horseradish peroxidase is used to amplify a weak signal and increase detectability of a target molecule, such as a protein. Horseradish peroxidase, product P8250, has been used to study nonoral antigens in inflamed gingiva and Ebola virus glycoprotein toxicity.
The enzyme has been used as a comparison during the peroxidase assay of extract from mature tall fescue leaf blades. It has also been used to measure H2O2 production.
Azioni biochim/fisiol
HRP readily combines with hydrogen peroxide (H2O2) and the resultant [HRP-H2O2] complex can oxidize a wide variety of hydrogen donors. The optimal pH is 6.0-6.5 and the enzyme is most stable in the pH range of 5.0-9.0. HRP can be conjugated to antibodies by several different methods including glutaraldehyde, periodate oxidation, through disulfide bonds, and also via amino and thiol directed cross-linkers. It is smaller and more stable than the enzyme labels β-galactosidase and alkaline phosphatase. Hence, it is the most desired label. Also, its glycosylation leads to lower non-specific binding. It is also used for the determination of glucose and peroxides in solution. Sodium azide, cyanide, L-cystine, dichromate, ethylenethiourea, hydroxylamine, sulfide, vanadate, p-aminobenzoic acid, and Cd2+, Co2+, Cu2+, Fe3+, Mn2+, Ni2+, Pb2+ ions are found to inhibit the enzyme activity.
When incubated with a substrate, horseradish peroxidase produces a coloured, fluorimetric, or luminescent derivative of the labeled molecule, allowing quantification. Horseradish peroxidase has been shown to slightly reduce the level of inhibition in a cydAB mutant.
Qualità
Preliminary work shows it to contain at least five isoenzymes.
Definizione di unità
Una unità di pirogallolo forma 1,0 mg di purpurogallina da pirogallolo in 20 secondi a pH 6,0 e 20 °C.
Risultati analitici
Il RZ (Reinheitszahl) è il rapporto di assorbanza A403/A275 determinato a 0,5-1,0 mg/mL in acqua deionizzata. Misura il contenuto di emina, non l′attività enzimatica. Anche preparazioni con un RZ elevato possono avere una bassa attività enzimatica.
Altre note
Per maggiori informazioni sulla perossidasi visitare la pagina www.sigma-aldrich.com/enzymeexplorer.
Inibitore
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Substrato
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Avvertenze
Danger
Indicazioni di pericolo
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Classi di pericolo
Resp. Sens. 1
Codice della classe di stoccaggio
13 - Non Combustible Solids
Classe di pericolosità dell'acqua (WGK)
WGK 1
Dispositivi di protezione individuale
Eyeshields, Gloves, type N95 (US)
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