P6140
Perossidasi
Type X, ammonium sulfate suspension
Sinonimo/i:
Donatore: idrogeno-perossido ossidoreduttasi, Perossidasi di rafano
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About This Item
Prodotti consigliati
Origine biologica
horseradish
Livello qualitativo
Tipo
Type X
Forma fisica
ammonium sulfate suspension
Attività specifica
≥225 units/mg protein (biuret, using pyrogallol)
PM
~44 kDa
Concentrazione
≥1.0 mg/mL
Rapporto di assorbanza
RZ 2.5-3.5
Temperatura di conservazione
2-8°C
InChI
1S/H2O3/c1-3-2/h1-2H
JSPLKZUTYZBBKA-UHFFFAOYSA-N
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Categorie correlate
Descrizione generale
La perossidasi di rafano si isola dalle radici del rafano (Amoracia rusticana) e appartiene al gruppo delle perossidasi con ferroprotoporfirina. L′HRP è un polipeptide a singola catena che contiene quattro ponti disolfuro. È una glicoproteina che contiene il 18% di carboidrati. La composizione dei carboidrati include galattosio, arabinosio, xilosio, fucosio, mannosio, mannosamina e galattosamina, a seconda del singolo isozima. Il peso molecolare (circa 44 kDa) include la catena polipeptidica (33.890 Dalton), la emina con Ca2+ (circa 700 Dalton) e il carboidrato (circa 9.400 Dalton). Esistono almeno sette isoenzimi di HRP. Il punto isoelettrico degli isoenzimi della perossidasi di rafano è compreso fra 3,0 e 9,0.
Applicazioni
Horseradish peroxidase (HRP) is isolated from horseradish roots (Amoracia rusticana). It is used in biochemistry applications such as western blots, ELISA and Immunohistochemistry. Horseradish peroxidase is used to amplify a weak signal and increase detectability of a target molecule, such as a protein. Product P6140 has been used to detect low density lipoprotein (LDL).
The enzyme from Sigma has been used while assessing the skin sensitization potential of pro-haptens. It has also been used to show that peroxidase (PO) activity and its heat stability correlate with the availability of free Ca2+ ions.
Azioni biochim/fisiol
HRP readily combines with hydrogen peroxide (H2O2) and the resultant [HRP-H2O2] complex can oxidize a wide variety of hydrogen donors. The optimal pH is 6.0-6.5 and the enzyme is most stable in the pH range of 5.0-9.0. HRP can be conjugated to antibodies by several different methods that include the use of glutaraldehyde, periodate oxidation, disulfide bonds, and also via amino- and thiol-directed cross-linkers. It is smaller and more stable than the enzyme labels, β-galactosidase and alkaline phosphatase. Hence, it is the most desired label. Also, its glycosylation leads to lower non-specific binding. It is also used for the determination of glucose and peroxides in solution. Sodium azide, cyanide, L-cystine, dichromate, ethylenethiourea, hydroxylamine, sulfide, vanadate, p-aminobenzoic acid, and Cd2+, Co2+, Cu2+, Fe3+, Mn2+, Ni2+, Pb2+ ions are found to inhibit its enzyme activity.
When incubated with a substrate, horseradish peroxidase produces a coloured, fluorimetric, or luminescent derivative of the labeled molecule, allowing quantification. Horseradish peroxidase has been shown to slightly reduce the level of inhibition in a cydAB mutant.
Definizione di unità
Una unità di pirogallolo forma 1,0 mg di purpurogallina da pirogallolo in 20 secondi a pH 6,0 e 20 °C.
Stato fisico
Crystalline suspension in 3.2 M (NH4)2SO4 solution containing potassium phosphate buffer, pH 6.0
Nota sulla preparazione
Water may be used to dilute suspension if needed.
Risultati analitici
Il RZ (Reinheitszahl) è il rapporto di assorbanza A403/A275 determinato a 0,5-1,0 mg/mL in acqua deionizzata. Misura il contenuto di emina, non l′attività enzimatica. Anche preparazioni con un RZ elevato possono avere una bassa attività enzimatica.
Preliminary studies indicate the presence of two basic and no acidic isoenzymes
Altre note
Per maggiori informazioni sulla perossidasi visitare la pagina www.sigma-aldrich.com/enzymeexplorer.
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Classi di pericolo
Resp. Sens. 1
Codice della classe di stoccaggio
11 - Combustible Solids
Classe di pericolosità dell'acqua (WGK)
WGK 1
Dispositivi di protezione individuale
Eyeshields, Gloves, type N95 (US)
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Instructions for working with enzymes supplied as ammonium sulfate suspensions
Protocolli
Reinheitszahl (RZ) is the ratio of absorbance due to hemin (A403, Soret region) to absorbance due to protein (A275).
This procedure is for the determination of Peroxidase enzymatic activity using Pyrogallol as the substrate.
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