P6556

Proteinase K

lyophilized powder, ≥30 units/mg protein

• Sinônimo(s): Endopeptidase K
• Número CAS: 39450-01-6
• Número da licença da enzima: 3.4.21.64 (BRENDA, IUBMB)
• Número CE: 254-457-8
• Número MDL: MFCD00132129
• Código UNSPSC: 12352204
• eCl@ss: 32160410
• NACRES: NA.54

Propriedades

• forma: lyophilized powder
• Nível de qualidade: 300
• atividade específica: ≥30 units/mg protein
• peso molecular: 28.93 kDa
• técnica(s): DNA extraction: suitable
• solubilidade: H₂O: soluble 1 mg/mL, clear, colorless
• atividade externa: Dnase ≤30 Kunitz units/mg solid; RNase ≤0.003 Kunitz units/mg solid
• Condições de expedição: wet ice
• temperatura de armazenamento: −20°C

Descrição

Aplicação

A proteinase K é útil na inativação proteolítica de nucleases durante o isolamento de DNA e RNA.
Ela é usada para remover endotoxinas ligadas a proteínas catiônicas, com lisozima e ribonuclease A.
É útil para isolar mitocôndrias
hepáticas, de levedura e de feijão-mungo e é usada para determinar a localização de enzimas nas membranas
É usada no tratamento de cortes de tecido embebidos em parafina para expor sítios de ligação de antígenos para marcação de anticorpos e
para digestão de proteínas de amostras de tecido cerebral para príons em pesquisa de encefalopatias espongiformes transmissíveis (EET). O produto P6556 é fornecido como pó liofilizado. O produto P6556 foi usado para quebrar a proteína do cristalino humano.

O produto P6556 é fornecido como pó liofilizado. O produto P6556 foi usado para quebrar a proteína do cristalino humano. O “footprinting” de protease pela digestão de proteinase K pode revelar interações proteína-proteína de superfície. A enzima da Sigma foi usada na etapa de pré-hibridização de embriões de galinha. Ela também foi usada para o enriquecimento de PrP^Sc, uma proteína príon que está presente em amostras de scrapie de ovelha, hamster e camundongo.

Útil na inativação proteolítica de nucleases durante o isolamento de DNA e RNA.
Remove endotoxinas que se ligam a proteínas catiônicas, como lisozima e ribonuclease A.
Segundo relatos, é útil no isolamento de mitocôndrias de fígado, levedura e feijão-mungo
Determinação da localização de enzimas em membranas
Tratamento de cortes de tecido embebidos em parafina para expor sítios de ligação a antígenos para marcação com anticorpos.
Digestão de proteínas de amostras de tecido cerebral para obter príons para pesquisa em encefalopatias espongiformes transmissíveis (EET).

Ações bioquímicas/fisiológicas

A proteinase K tem uma ampla especificidade e degrada muitas proteínas, mesmo no estado nativo. Em sua maior parte, ela cliva a ligação peptídica adjacente ao grupo carboxila de aminoácidos aromáticos e alifáticos com grupos α amina bloqueados. O pH ótimo é entre 7,5-9,0, o ponto isoelétrico é 8,9 Ca²⁺ (1-5 mM) é necessário para a ativação. A proteinase K é inibida por diisopropilfluorofosfato (DFP) e fluoreto de fenilmetilsulfonil (PMSF).

A proteinase K é uma protease de serina estável e altamente reativa. Evidências provenientes de estudos da estrutura cristalina e molecular indicam que a enzima pertence à família das subtilisinas, com uma tríade catalítica no sítio ativo (Asp³⁹-His⁶⁹-Ser²²⁴). Ela é estável em uma ampla variedade de ambientes: pH, sais tamponantes, detergentes (SDS) e temperatura. Na presença de SDS a 0,1%-0,5%, a proteinase K retém sua atividade e digere diversas proteínas e nucleases em preparados de DNA, sem comprometer a integridade do DNA isolado.

Definição da unidade

Uma unidade hidrolisa hemoglobina desnaturada por ureia para produzir uma cor equivalente a 1,0 μmol de tirosina por min em pH 7,5 a 37 °C (cor pelo reagente de Folin-Ciocalteu).

Informações de segurança

• Pictogramas: GHS08,GHS07
• Palavra indicadora: Danger
• Frases de perigo: H315,H319,H334,H335
• Declarações de precaução: P261 - P264 - P271 - P280 - P302 + P352 - P305 + P351 + P338
• Classificações de perigo: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• Órgãos-alvo: Respiratory system
• Código de classe de armazenamento: 11 - Combustible Solids
• Classe de risco de água (WGK): WGK 1
• Ponto de fulgor (°F): Not applicable
• Ponto de fulgor (°C): Not applicable
• Equipamento de proteção individual: dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves