SAE0009

Proteinase K

≥30 units/mg protein

• Sinônimo(s): Endopeptidase K
• Número CAS: 39450-01-6
• Número da licença da enzima: 3.4.21.64 (BRENDA, IUBMB)
• Número CE: 254-457-8
• Número MDL: MFCD00132129
• Código UNSPSC: 12352204
• NACRES: NA.54

Propriedades

• fonte biológica: fungus (Tritirachium album)
• Nível de qualidade: 200
• forma: lyophilized powder
• atividade específica: ≥30 units/mg protein
• peso molecular: 28.93 kDa
• técnica(s): DNA extraction: suitable
• atividade externa: DNAse, RNAse, none detected.
• temperatura de armazenamento: −20°C

Descrição

Descrição geral

Proteinase K (PK) from fungi, Tritirachium album encodes a 40 kDa protein. The N-terminal propeptide region shows homology with bacterial subtilisin. PK crystallizes even under microgravity conditions on the space shuttle mission. PK is an effective protein system for studying protein engineering process.

Aplicação

Útil na inativação proteolítica de nucleases durante o isolamento de DNA e RNA.
Remove endotoxinas que se ligam a proteínas catiônicas, como lisozima e ribonuclease A.
Segundo relatos, é útil no isolamento de mitocôndrias de fígado, levedura e feijão-mungo
Determinação da localização de enzimas em membranas
Tratamento de cortes de tecido embebidos em parafina para expor sítios de ligação a antígenos para marcação com anticorpos.
Digestão de proteínas de amostras de tecido cerebral para obter príons para pesquisa em encefalopatias espongiformes transmissíveis (EET).

Protease footprinting by Proteinase K digestion can reveal protein-protein surface interactions. The enzyme from Sigma has been used in the pre-hybridization step of chicken embryos. It has also been used for the enrichment of PrPSc, a prion protein that is present in sheep, hamster and mouse scrapie samples.

Proteinase K is useful for the proteolytic inactivation of nucleases during the isolation of DNA and RNA.
It is used for the removal of endotoxins bound to cationic proteins such as lysozyme and ribonuclease A.
It is useful for the isolation of hepatic, yeast, and mung bean mitochondria and is used to determine enzyme localization on membranes
It is used for the treatment of paraffin embedded tissue sections to expose antigen binding sites for antibody labeling and for digestion of proteins from brain tissue samples for prions in Transmissible Spongiform Encephalopathies (TSE) research. Product SAE0009 is provided as a lyophilized powder. Product SAE0009 has been used to break down human lens protein¹.

Ações bioquímicas/fisiológicas

Proteinase K has a broad specificity and degrades many proteins even in the native state. It mainly cleaves the peptide bond adjacent to the carboxyl group of aliphatic and aromatic amino acids with blocked a-amino groups.The optimum pH is between 7.5-9.0 and the isoelectric point is 8.9 Ca²⁺ (1-5 mM) is required for activation. Proteinase K is inhibited by diisopropyl fluorophosphate (DFIP), and phenylmethanesulfonyl fluoride (PMSF).

A proteinase K é uma protease de serina estável e altamente reativa. Evidências provenientes de estudos da estrutura cristalina e molecular indicam que a enzima pertence à família das subtilisinas, com uma tríade catalítica no sítio ativo (Asp³⁹-His⁶⁹-Ser²²⁴). Ela é estável em uma ampla variedade de ambientes: pH, sais tamponantes, detergentes (SDS) e temperatura. Na presença de SDS a 0,1%-0,5%, a proteinase K retém sua atividade e digere diversas proteínas e nucleases em preparados de DNA, sem comprometer a integridade do DNA isolado.

Definição da unidade

One unit will hydrolyze urea-denatured hemoglobin to produce color equivalent to 1.0 μmole of tyrosine per min at pH 7.5 at 37 °C (color by Folin-Ciocalteu reagent).

Informações de segurança

• Pictogramas: GHS08,GHS07
• Palavra indicadora: Danger
• Frases de perigo: H315,H319,H334,H335
• Declarações de precaução: P261 - P264 - P271 - P280 - P302 + P352 - P305 + P351 + P338
• Classificações de perigo: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• Órgãos-alvo: Respiratory system
• Código de classe de armazenamento: 11 - Combustible Solids
• Classe de risco de água (WGK): WGK 1
• Ponto de fulgor (°F): Not applicable
• Ponto de fulgor (°C): Not applicable