12156792910
Roche
Kit de detecção de morte celular in situ, TMR vermelho
sufficient for ≤50 tests
Sinônimo(s):
Tm vermelho, Kit de detecção de morte celular in situ, Vermelho, tm, Kit de detecção de morte celular in situ
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About This Item
Código UNSPSC:
12352200
Produtos recomendados
uso
sufficient for ≤50 tests
Nível de qualidade
fabricante/nome comercial
Roche
técnica(s)
flow cytometry: suitable
temperatura de armazenamento
−20°C
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Descrição geral
Kit de detecção e quantificação de morte celular apoptótica no nível de célula única por citometria de fluxo e microscopia de fluorescência, e para marcação dupla com marcadores celulares marcados com fluoresceína (TMR red).
Métodos amplamente utilizados para determinar apoptose incluem análise de DNA genômico por eletroforese em gel de agarose e ensaios de fragmentação de DNA à base de 3H-timidina e, alternativamente, 5-bromo-2′-desoxi-uridina. Os métodos envolvem a separação do DNA fragmentado de baixo peso molecular do DNA não fragmentado, de maior peso molecular, em determinada população celular. Portanto, esses métodos não fornecem informações sobre o destino de uma célula individual em uma dada população celular ou, especialmente, em cortes de tecido. Alternativamente, células apoptóticas individuais podem ser reconhecidas microscopicamente pelo aspecto característico de condensação da cromatina nuclear e fragmentação, mas esse método é subjetivo e limitado à janela de tempo relativamente estreita quando as alterações morfológicas atingem grau máximo.
O indicador distintivo de apoptose é a degradação do DNA que, nos estágios iniciais, é seletiva das regiões conectoras do DNA internucleossomal. A clivagem do DNA pode gerar talhos (nicks) no DNA dupla-fita e fita simples. Ambos os tipos de quebras podem ser detectados marcando as terminações 3′-OH livres com nucleotídeos modificados (p. ex., biotina-dUTP, DIG-dUTP, fluoresceína-dUTP) em uma reação enzimática. A enzima desoxinucleotidil-transferase terminal (TdT) catalisa a polimerização independente de molde de desoxirribonucleotídeos na terminação 3′ de DNA dupla-fita e fita simples. Este método também foi chamado de TUNEL (marcação de talhos (“nick”) por dUTP-X mediada por TdT). Alternativamente, grupos 3′-OH livres podem ser marcados usando DNA polimerases pelo mecanismo dependente de molde chamado de tradução de talhos (“nicks”). Contudo, o método TUNEL é considerado mais sensível e mais rápido.
Material de amostra: Células em suspensão, citospina e preparados de esfregaços de células, células aderentes cultivadas em lâminas, e cortes de tecido congelados e embebidos em parafina.
Princípio
O kit de detecção de morte celular in situ, TMR red é baseado na detecção de quebras no DNA de fita simples e dupla que ocorrem nos estágios iniciais da apoptose.
Células apoptóticas são fixadas e permeabilizadas. Subsequentemente, as células são incubadas com uma mistura de reação para TUNEL que contém TdT e TMR-dUTP. Durante este período de incubação, a TdT catalisa a adição de TMR-dUTP em grupos de 3′-OH livres em DNA de fita simples e dupla. Após a lavagem, o marcador incorporado nos sítios danificados de DNA é visualizado por citometria de fluxo e/ou microscopia de fluorescência.
O indicador distintivo de apoptose é a degradação do DNA que, nos estágios iniciais, é seletiva das regiões conectoras do DNA internucleossomal. A clivagem do DNA pode gerar talhos (nicks) no DNA dupla-fita e fita simples. Ambos os tipos de quebras podem ser detectados marcando as terminações 3′-OH livres com nucleotídeos modificados (p. ex., biotina-dUTP, DIG-dUTP, fluoresceína-dUTP) em uma reação enzimática. A enzima desoxinucleotidil-transferase terminal (TdT) catalisa a polimerização independente de molde de desoxirribonucleotídeos na terminação 3′ de DNA dupla-fita e fita simples. Este método também foi chamado de TUNEL (marcação de talhos (“nick”) por dUTP-X mediada por TdT). Alternativamente, grupos 3′-OH livres podem ser marcados usando DNA polimerases pelo mecanismo dependente de molde chamado de tradução de talhos (“nicks”). Contudo, o método TUNEL é considerado mais sensível e mais rápido.
Material de amostra: Células em suspensão, citospina e preparados de esfregaços de células, células aderentes cultivadas em lâminas, e cortes de tecido congelados e embebidos em parafina.
Princípio
O kit de detecção de morte celular in situ, TMR red é baseado na detecção de quebras no DNA de fita simples e dupla que ocorrem nos estágios iniciais da apoptose.
Células apoptóticas são fixadas e permeabilizadas. Subsequentemente, as células são incubadas com uma mistura de reação para TUNEL que contém TdT e TMR-dUTP. Durante este período de incubação, a TdT catalisa a adição de TMR-dUTP em grupos de 3′-OH livres em DNA de fita simples e dupla. Após a lavagem, o marcador incorporado nos sítios danificados de DNA é visualizado por citometria de fluxo e/ou microscopia de fluorescência.
Especificidade
A reação do TUNEL marca preferencialmente as quebras na fita de DNA geradas durante a apoptose. Isso permite a discriminação de apoptose de necrose e das quebras primárias na fita de DNA induzidas por medicamentos citostáticos ou radiação.
Aplicação
O kit de detecção de morte celular in situ, o TMR red foi usado em ensaio de marcação terminal de "nicks" por biotina-dUTP e desoxinucleotidil transferase (TUNEL). Ela foi usada em ensaio de detecção de apoptose.
Técnica precisa, rápida e simples para detectar e quantificar fragmentação de DNA apoptótico no nível de células únicas em células e tecidos com marcador fluorescente vermelho para microscopia de fluorescência e citometria de fluxo.
Embalagem
1 kit contendo 2 componentes.
Nota de preparo
Concentração de trabalho: Concentração enzimática
A concentração enzimática ideal varia de 0,5 a 5 U por ensaio. Para 50 μl de PCR padrão, recomendamos usar 2 U da mistura enzimática.
Solução de trabalho: Adicione um volume total (50 μl) de solução enzimática aos 450 μl restante de solução de marcador para obter 500 μl de mistura de reação para TUNEL.
Misture bem para equilibrar os componentes.
Condições de armazenamento (solução de trabalho): A mistura de reação para TUNEL deve ser preparada imediatamente antes do uso e não deve ser armazenada. Mantenha a mistura de reação para TUNEL em gelo até o uso.
A concentração enzimática ideal varia de 0,5 a 5 U por ensaio. Para 50 μl de PCR padrão, recomendamos usar 2 U da mistura enzimática.
Solução de trabalho: Adicione um volume total (50 μl) de solução enzimática aos 450 μl restante de solução de marcador para obter 500 μl de mistura de reação para TUNEL.
Misture bem para equilibrar os componentes.
Condições de armazenamento (solução de trabalho): A mistura de reação para TUNEL deve ser preparada imediatamente antes do uso e não deve ser armazenada. Mantenha a mistura de reação para TUNEL em gelo até o uso.
A mistura de reação para TUNEL deve ser preparada misturando a solução enzimática e a solução de marcação antes do uso.
Somente componentes do kit
Nº do produto
Descrição
- Enzyme Solution (TdT)
- Label Solution (TMR-dUTP)
Palavra indicadora
Danger
Frases de perigo
Declarações de precaução
Classificações de perigo
Aquatic Chronic 2 - Carc. 1B Inhalation
Código de classe de armazenamento
6.1D - Non-combustible acute toxic Cat.3 / toxic hazardous materials or hazardous materials causing chronic effects
Classe de risco de água (WGK)
WGK 3
Ponto de fulgor (°F)
does not flash
Ponto de fulgor (°C)
does not flash
Certificados de análise (COA)
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