S7100
Kit de detecção de apoptose in situ ApopTag Peroxidase
The ApopTag Peroxidase In Situ Apoptosis Detection Kit detects apoptotic cells in situ by labeling & detecting DNA strand breaks by the TUNEL method.
Sinônimo(s):
Kit ApopTag, Kit de detecção de apoptose in situ
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About This Item
Código UNSPSC:
12161503
eCl@ss:
32161000
NACRES:
NA.84
Produtos recomendados
Nível de qualidade
fabricante/nome comercial
ApopTag
Chemicon®
método de detecção
colorimetric
Condições de expedição
dry ice
Descrição geral
A apoptose é uma forma de morte celular que elimina células comprometidas ou supérfluas. Ela é controlada por diversas vias efetoras e de sinalização que medeiam as respostas ativas ao crescimento externo, sobrevivência ou fatores de morte celular. Os controles de checagem do ciclo celular estão ligados às cascatas enzimáticas apoptóticas e a integridade dessas e outras ligações pode ser geneticamente comprometida em muitas doenças, como o câncer. Há muitos livros impressos e centenas de artigos de revisão recentes sobre todos os aspectos da apoptose (p. ex., 7, 11, 19, 24, 39, 42), bem como os métodos para detectá-la (p. ex. 10, 32, 36).
De todos os aspectos da apoptose, a característica que a define é uma mudança completa na morfologia celular. Como observado por microscopia eletrônica, a célula passa por retração, marginação da cromatina, formação de bolhas na membrana, condensação nuclear e, em seguida, segmentação e divisão em corpos apoptóticos que podem ser fagocitados (11, 19, 24). Os corpos apoptóticos característicos têm vida curta e são minúsculos, podendo se assemelhar a outros componentes celulares quando visualizados por microscopia de campo claro. A fragmentação do DNA em células apoptóticas é seguida pela morte celular e remoção do tecido, geralmente dentro de várias horas (7). Uma taxa de regressão tecidual de 25% ao dia pode ser resultante de uma apoptose aparente em apenas 2%-3% das células ao mesmo tempo (6). Portanto, a medição quantitativa de um índice apoptótico com base somente na morfologia pode ser difícil.
Frequentemente, a fragmentação do DNA é associada a alterações ultraestruturais na morfologia celular na apoptose (26, 38). Em uma série de sistemas modelo bem pesquisados, grandes fragmentos de 300 kb e 50 kb são produzidos primeiro por degradação endonucleolítica da organização estrutural da cromatina de ordem superior. Esses grandes fragmentos de DNA são visíveis em géis de eletroforese de campo pulsado (5, 43, 44). Na maioria dos modelos, a ativação da atividade de endonucleases dependente de Ca2+ e Mg2+ encurta ainda mais os fragmentos pela clivagem do DNA nos sítios de ligação entre os nucleossomos (3). Os fragmentos de DNA finais são multímeros de unidades nucleossomais com cerca de 180 pb. Esses multímeros surgem como a conhecida "escada de DNA" observada nos géis de agarose para eletroforese padrão de DNA extraído de vários tipos de células apoptóticas (p. ex., 3, 7,13, 35, 44).
Outro método para examinar a apoptose por meio da fragmentação de DNA é o ensaio de TUNEL, (13) que é base da tecnologia ApopTag. As quebras na fita de DNA são detectadas pela marcação enzimática das terminações 3′-OH livres com nucleotídeos modificados. Essas novas terminações de DNA que são geradas na fragmentação do DNA tipicamente se localizam em núcleos morfologicamente identificáveis e corpos apoptóticos. Em contrapartida, núcleos normais ou proliferativos, que têm números relativamente insignificantes de terminações 3′-OH de DNA, geralmente não são corados com o kit. Os kits ApopTag detectam quebras de fita simples (25) e fita dupla associadas a apoptose. Dano ao DNA induzido por fármaco não é identificado pelo ensaio de TUNEL, a menos que seja acompanhado de resposta apoptótica (8). Além disso, essa técnica pode detectar a apoptose em estágio inicial nos sistemas em que a condensação de cromatina começou e há menos quebras nas fitas, mesmo antes do núcleo passar por alterações morfológicas importantes (4, 8).
A apoptose é distinta da morte celular acidental (necrose). Várias diferenças morfológicas e bioquímicas que distinguem a morte celular apoptótica da necrótica estão resumidas na tabela a seguir (adaptada com permissão da referência 39).
De todos os aspectos da apoptose, a característica que a define é uma mudança completa na morfologia celular. Como observado por microscopia eletrônica, a célula passa por retração, marginação da cromatina, formação de bolhas na membrana, condensação nuclear e, em seguida, segmentação e divisão em corpos apoptóticos que podem ser fagocitados (11, 19, 24). Os corpos apoptóticos característicos têm vida curta e são minúsculos, podendo se assemelhar a outros componentes celulares quando visualizados por microscopia de campo claro. A fragmentação do DNA em células apoptóticas é seguida pela morte celular e remoção do tecido, geralmente dentro de várias horas (7). Uma taxa de regressão tecidual de 25% ao dia pode ser resultante de uma apoptose aparente em apenas 2%-3% das células ao mesmo tempo (6). Portanto, a medição quantitativa de um índice apoptótico com base somente na morfologia pode ser difícil.
Frequentemente, a fragmentação do DNA é associada a alterações ultraestruturais na morfologia celular na apoptose (26, 38). Em uma série de sistemas modelo bem pesquisados, grandes fragmentos de 300 kb e 50 kb são produzidos primeiro por degradação endonucleolítica da organização estrutural da cromatina de ordem superior. Esses grandes fragmentos de DNA são visíveis em géis de eletroforese de campo pulsado (5, 43, 44). Na maioria dos modelos, a ativação da atividade de endonucleases dependente de Ca2+ e Mg2+ encurta ainda mais os fragmentos pela clivagem do DNA nos sítios de ligação entre os nucleossomos (3). Os fragmentos de DNA finais são multímeros de unidades nucleossomais com cerca de 180 pb. Esses multímeros surgem como a conhecida "escada de DNA" observada nos géis de agarose para eletroforese padrão de DNA extraído de vários tipos de células apoptóticas (p. ex., 3, 7,13, 35, 44).
Outro método para examinar a apoptose por meio da fragmentação de DNA é o ensaio de TUNEL, (13) que é base da tecnologia ApopTag. As quebras na fita de DNA são detectadas pela marcação enzimática das terminações 3′-OH livres com nucleotídeos modificados. Essas novas terminações de DNA que são geradas na fragmentação do DNA tipicamente se localizam em núcleos morfologicamente identificáveis e corpos apoptóticos. Em contrapartida, núcleos normais ou proliferativos, que têm números relativamente insignificantes de terminações 3′-OH de DNA, geralmente não são corados com o kit. Os kits ApopTag detectam quebras de fita simples (25) e fita dupla associadas a apoptose. Dano ao DNA induzido por fármaco não é identificado pelo ensaio de TUNEL, a menos que seja acompanhado de resposta apoptótica (8). Além disso, essa técnica pode detectar a apoptose em estágio inicial nos sistemas em que a condensação de cromatina começou e há menos quebras nas fitas, mesmo antes do núcleo passar por alterações morfológicas importantes (4, 8).
A apoptose é distinta da morte celular acidental (necrose). Várias diferenças morfológicas e bioquímicas que distinguem a morte celular apoptótica da necrótica estão resumidas na tabela a seguir (adaptada com permissão da referência 39).
O kit de detecção de apoptose in situ ApopTag Peroxidase detecta células apoptóticas in situ pela marcação e detecção de quebras na fita de DNA pelo método de TUNEL. O kit inclui reagentes suficientes para coloração por imunoperoxidase de 40 amostras. Os resultados são visualizados usando microscopia de campo claro.
Componentes
Tampão de equilíbrio: 3,0 ml -15 °C a -25 °C
Tampão de reação 2,0 ml -15 °C a -25 °C
Enzima TdT 0,64 ml -15 °C a -25 °C
Tampão de interrupção/lavagem 20 ml -15 °C a -25 °C
Antidigoxigenina-peroxidase* 3,0 ml 2 °C a 8 °C
Lamínulas de plástico 100 cada. Temp. ambiente
Observação: É necessária a compra separada de DAB (substrato da peroxidase). Ele não é fornecido com esse kit.
Número de amostras por kit: São fornecidos materiais suficientes para corar 40 amostras de tecido de aproximadamente 5 mm2 cada, quando usado de acordo com as instruções. O tampão de reação será totalmente consumido antes de outros reagentes quando os kits forem usados para amostras preparadas em lâminas.
Tampão de reação 2,0 ml -15 °C a -25 °C
Enzima TdT 0,64 ml -15 °C a -25 °C
Tampão de interrupção/lavagem 20 ml -15 °C a -25 °C
Antidigoxigenina-peroxidase* 3,0 ml 2 °C a 8 °C
Lamínulas de plástico 100 cada. Temp. ambiente
Observação: É necessária a compra separada de DAB (substrato da peroxidase). Ele não é fornecido com esse kit.
Número de amostras por kit: São fornecidos materiais suficientes para corar 40 amostras de tecido de aproximadamente 5 mm2 cada, quando usado de acordo com as instruções. O tampão de reação será totalmente consumido antes de outros reagentes quando os kits forem usados para amostras preparadas em lâminas.
Armazenamento e estabilidade
Armazene o kit entre -15 °C e -25 °C até o primeiro uso. Após o primeiro uso, se o kit for utilizado no prazo de três meses, armazene a enzima TdT (90418) entre -15 °C e -25 °C e armazene os demais componentes entre 2 °C e 8 °C.
Precauções
1.Os seguintes componentes do kit contêm cacodilato de potássio (ácido dimetilarsínico) como tampão: Tampão de equilíbrio (90416), tampão de reação (90417) e enzima TdT (90418). Esses componentes são nocivos se ingeridos; evite contato com a pele e com os olhos (use luvas e óculos de proteção) e lave as áreas de contato imediatamente.
2. Os conjugados de anticorpo (90420) e as soluções de bloqueio (n.º 10 e n.º 13) contêm azida sódica a 0,08% como conservante.
3. A enzima TdT (90418) contém glicerol e não congela a -20 °C. Para maximizar a vida útil, não aqueça esse reagente a temperatura ambiente antes da dispensação.
Precauções
1.Os seguintes componentes do kit contêm cacodilato de potássio (ácido dimetilarsínico) como tampão: Tampão de equilíbrio (90416), tampão de reação (90417) e enzima TdT (90418). Esses componentes são nocivos se ingeridos; evite contato com a pele e com os olhos (use luvas e óculos de proteção) e lave as áreas de contato imediatamente.
2. Os conjugados de anticorpo (90420) e as soluções de bloqueio (n.º 10 e n.º 13) contêm azida sódica a 0,08% como conservante.
3. A enzima TdT (90418) contém glicerol e não congela a -20 °C. Para maximizar a vida útil, não aqueça esse reagente a temperatura ambiente antes da dispensação.
Informações legais
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Palavra indicadora
Danger
Frases de perigo
Declarações de precaução
Classificações de perigo
Aquatic Chronic 2 - Carc. 1B - Skin Sens. 1 - STOT RE 2 Inhalation
Órgãos-alvo
Respiratory Tract
Código de classe de armazenamento
6.1C - Combustible acute toxic Cat.3 / toxic compounds or compounds which causing chronic effects
Certificados de análise (COA)
Busque Certificados de análise (COA) digitando o Número do Lote do produto. Os números de lote e remessa podem ser encontrados no rótulo de um produto após a palavra “Lot” ou “Batch”.
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Cellular apoptosis assays to detect programmed cell death using Annexin V, Caspase and TUNEL DNA fragmentation assays.
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