11468120910
Roche
Ensaio de transcriptase reversa, colorimétrico
suitable for enzyme immunoassay, kit of 1 (14 components), sufficient for ≤200 tests
Sinônimo(s):
RT-PCR
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About This Item
Código UNSPSC:
41105333
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uso
sufficient for ≤200 tests
Nível de qualidade
embalagem
kit of 1 (14 components)
fabricante/nome comercial
Roche
técnica(s)
enzyme immunoassay: suitable
temperatura de armazenamento
−20°C
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Descrição geral
Imunoensaio enzimático colorimétrico para determinação quantitativa da atividade da transcriptase reversa retroviral por incorporação de dUTP marcada com digoxigenina e biotina no DNA.
Aplicação
O ensaio de transcriptase reversa é projetado para a determinação quantitativa da atividade de RT em cultura celular e outras amostras biológicas. O ensaio é usado para determinar a propagação de retrovírus em células de mamíferos infectadas por retrovírus em cultura. O ensaio também é usado para triagem in vitro de inibidores da RT.
Embalagem
1 kit contendo 14 componentes.
Especificações
O ensaio detecta a atividade da transcriptase reversa retroviral natural ou recombinante, incluindo as de HIV-1, HIV-2, SIV-1, AMV e M-MulV.
Os ensaios para atividade de transcriptase reversa (RT) foram amplamente aplicados para testar a propagação retroviral in vitro. A RT é necessária para a síntese precoce de DNA pró-viral e, portanto, é um alvo importante para terapia antirretroviral, por exemplo, no caso da síndrome da imunodeficiência adquirida (AIDS). A transcriptase reversa, de modo geral, usa RNA, que é complexado com vários primers, como um molde para síntese de DNA. Classicamente, para detectar ou quantificar a atividade de RT, mede-se a quantidade de nucleotídeos radiomarcados incorporados.
Tempo de ensaio: Aproximadamente 4 horas (para uma reação enzimática de 1 hora), aproximadamente 18 horas (para uma reação enzimática de 15 horas).
Material de amostra: Sobrenadante de cultura celular e outras amostras biológicas, inibidores de RT.
Sensibilidade: O ensaio da transcriptase reversa detecta 20 pg de transcriptase reversa de HIV-1 em uma reação de 1 hora. Um pg pode ser detectado em uma reação de um dia para o outro.
Tempo de ensaio: Aproximadamente 4 horas (para uma reação enzimática de 1 hora), aproximadamente 18 horas (para uma reação enzimática de 15 horas).
Material de amostra: Sobrenadante de cultura celular e outras amostras biológicas, inibidores de RT.
Sensibilidade: O ensaio da transcriptase reversa detecta 20 pg de transcriptase reversa de HIV-1 em uma reação de 1 hora. Um pg pode ser detectado em uma reação de um dia para o outro.
Princípio
O ensaio colorimétrico da transcriptase reversa se vale da capacidade da transcriptase reversa de sintetizar o DNA usando o híbrido poli (A) x oligo (dT)15 como molde e primer. Ele evita o uso de nucleotídeos marcados com [3H]- ou [32P]-, que são empregados em ensaios de RT padrão. No lugar dos nucleotídeos radiomarcados, os nucleotídeos marcados com digoxigenina e biotina em uma proporção ideal são incorporados na mesma molécula de DNA pela atividade da RT. Um híbrido de molde/primer é fornecido, mas a flexibilidade do ensaio permite o uso de um modelo de escolha (por exemplo, um modelo viral). A detecção e quantificação do DNA sintetizado como parâmetro para a atividade da RT segue um protocolo de ELISA sanduíche: o DNA marcado com biotina se liga à superfície dos módulos da microplaca revestidos com estreptavidina. Na etapa seguinte, um anticorpo para digoxigenina, conjugado com a peroxidase (anti-DIG-POD), é adicionado e ligado aos nucleotídeos marcados com digoxigenina (Licenciada pelo Instituto Pasteur). Na etapa final, o substrato da peroxidase ABTS é adicionado. A enzima peroxidase catalisa a clivagem do substrato para produzir um produto de reação colorido. A absorbância das amostras é determinada por meio de um leitor de microplacas (ELISA) e está diretamente correlacionada com o nível de atividade da RT na amostra.
Outras notas
Somente para fins de pesquisas biológicas. Não é destinado ao uso em procedimentos diagnósticos.
Somente componentes do kit
Nº do produto
Descrição
- HIV-1 Reverse Transcriptase
- Incubation Buffer
- Nucleotides
- Template/Primer Hybrid
- Lysis Buffer
- Anti-Digoxigenin-POD antibody
- Washing Buffer Concentrate 10x concentrated
- Conjugate Dilution Buffer
- Substrate Buffer
- ABTS Substrate
- Substrate Enhancer
- Microplate Modules, precoated with streptavidin
- One Strip Frame (for 8-well microplate modules)
- Cover Foils for Microplates
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Palavra indicadora
Danger
Frases de perigo
Declarações de precaução
Classificações de perigo
Aquatic Chronic 3 - Eye Dam. 1 - Skin Sens. 1
Código de classe de armazenamento
12 - Non Combustible Liquids
Classe de risco de água (WGK)
WGK 2
Ponto de fulgor (°F)
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Ponto de fulgor (°C)
does not flashNot applicable
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