S7150
Kit de detecção de oxidação de proteínas OxyBlot
The OxyBlot Protein Oxidation Detection Kit provides the reagents to perform the immunoblot detection of carbonyl groups introduced into proteins by oxidative reactions with ozone or oxides of nitrogen or by metal catalyzed oxidation.
Sinônimo(s):
Ensaio OxyBlot, Kit de oxidação de proteínas
Faça loginpara ver os preços organizacionais e de contrato
About This Item
Código UNSPSC:
12161503
eCl@ss:
32161000
NACRES:
NA.84
Produtos recomendados
Nível de qualidade
fabricante/nome comercial
Chemicon®
OxyBlot
técnica(s)
western blot: suitable
método de detecção
chemiluminescent
Condições de expedição
wet ice
Descrição geral
A modificação oxidativa de proteínas por radicais livres de oxigênio e outras espécies reativas ocorre em processos fisiológicos e patológicos. Como consequência da modificação, os grupos carbonilo são introduzidos nas cadeias laterais das proteínas por um mecanismo específico do local. O Kit OxyBlot fornece reagentes para imunodetecção simples e sensível desses grupos carbonila, que é uma marca registrada do estado de oxidação das proteínas.
Aplicação
Preparação de lisado celular
1. Lave as células aderentes duas vezes no prato ou frasco com PBS gelado e escorra o PBS. Lave as células não aderentes em PBS e centrifugue a 800 a 1000 rpm numa centrífuga de bancada durante 5 minutos para sedimentar as células.
2. Adicione tampão RIPA gelado às células (1 ml por 107 células/placa de 100 mm/frasco de 150 cm2; 0,5 ml por 5 x 106 células/placa de 60 mm/balão de 75 cm2).
3. Raspe as células aderentes do prato ou frasco com um policial de borracha ou um raspador de células de plástico que foi resfriado em água destilada gelada. Transfira a suspensão celular para um tubo de centrífuga. Agite suavemente a suspensão em um balancim ou em um agitador orbital na sala fria por 15 minutos para lisar as células.
4. Centrifugue o lisado a 14.000 x g numa centrífuga pré-arrefecida durante 15 minutos. Transfira imediatamente o sobrenadante para um tubo de centrífuga novo e descarte o pellet.
5. Dilua o lisado celular pelo menos 1 vez: 10 antes de determinar a concentração de proteína devido à interferência dos detergentes no tampão de lise com o reagente à base de Coomassie. Nesta etapa, a amostra pode ser dividida em alíquotas e armazenada a -20¡C por até um mês.
DICA: Ao trabalhar com grandes volumes de células não aderentes, as células podem não ser resfriadas com rapidez suficiente para manter a atividade da proteína em estudo. Neste caso, despeje a suspensão de células em uma mistura de massa igual de 2 x PBS e gelo, em seguida, colete as células por centrifugação e realize a lise conforme descrito acima.
Tampão de lise RIPA:
Número de catálogo 20-188
http://www.millipore.com/catalogue/item/20-188
O agente redutor é muito importante para prevenir a oxidação:
O lisado proteico pode ser preparado utilizando uma variedade de protocolos. A maioria dos tampões padrão, como RIPA e Triton, também são adequados. Recomenda-se que seja adicionado um agente redutor ao tampão de lise para evitar a oxidação de proteínas que pode ocorrer após a lise celular. O tampão de lise contendo 1-2% de 2-mercaptoetanol ou DTT 50 mM inibe suficientemente esta oxidação, mas não tem efeito adverso na reação de derivatização no protocolo OxyBlot. Amostras de proteínas purificadas também são adequadas para análise com o Kit OxyBlot.
Para informações gerais sobre extração de proteínas, consulte este link.
http://www.millipore.com/immunodetection/id3/proteinextraction
1. Lave as células aderentes duas vezes no prato ou frasco com PBS gelado e escorra o PBS. Lave as células não aderentes em PBS e centrifugue a 800 a 1000 rpm numa centrífuga de bancada durante 5 minutos para sedimentar as células.
2. Adicione tampão RIPA gelado às células (1 ml por 107 células/placa de 100 mm/frasco de 150 cm2; 0,5 ml por 5 x 106 células/placa de 60 mm/balão de 75 cm2).
3. Raspe as células aderentes do prato ou frasco com um policial de borracha ou um raspador de células de plástico que foi resfriado em água destilada gelada. Transfira a suspensão celular para um tubo de centrífuga. Agite suavemente a suspensão em um balancim ou em um agitador orbital na sala fria por 15 minutos para lisar as células.
4. Centrifugue o lisado a 14.000 x g numa centrífuga pré-arrefecida durante 15 minutos. Transfira imediatamente o sobrenadante para um tubo de centrífuga novo e descarte o pellet.
5. Dilua o lisado celular pelo menos 1 vez: 10 antes de determinar a concentração de proteína devido à interferência dos detergentes no tampão de lise com o reagente à base de Coomassie. Nesta etapa, a amostra pode ser dividida em alíquotas e armazenada a -20¡C por até um mês.
DICA: Ao trabalhar com grandes volumes de células não aderentes, as células podem não ser resfriadas com rapidez suficiente para manter a atividade da proteína em estudo. Neste caso, despeje a suspensão de células em uma mistura de massa igual de 2 x PBS e gelo, em seguida, colete as células por centrifugação e realize a lise conforme descrito acima.
Tampão de lise RIPA:
Número de catálogo 20-188
http://www.millipore.com/catalogue/item/20-188
O agente redutor é muito importante para prevenir a oxidação:
O lisado proteico pode ser preparado utilizando uma variedade de protocolos. A maioria dos tampões padrão, como RIPA e Triton, também são adequados. Recomenda-se que seja adicionado um agente redutor ao tampão de lise para evitar a oxidação de proteínas que pode ocorrer após a lise celular. O tampão de lise contendo 1-2% de 2-mercaptoetanol ou DTT 50 mM inibe suficientemente esta oxidação, mas não tem efeito adverso na reação de derivatização no protocolo OxyBlot. Amostras de proteínas purificadas também são adequadas para análise com o Kit OxyBlot.
Para informações gerais sobre extração de proteínas, consulte este link.
http://www.millipore.com/immunodetection/id3/proteinextraction
Armazenamento e estabilidade
Armazene o padrão de proteína (componente 90450) entre -25° e -15°C após o recebimento. Armazene todos os outros componentes entre 2°C e 8°C.
Informações legais
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Exoneração de responsabilidade
Exceto quando indicado em contrário em nosso catálogo ou em outros documentos da empresa que acompanham o(s) produto(s), os nossos produtos destinam-se somente ao uso em pesquisa e não devem ser usados para qualquer outra finalidade, o que inclui, dentre outros, usos comerciais não autorizados, usos para diagnóstico in vitro, usos terapêuticos ex vivo ou in vivo, ou qualquer tipo de consumo ou aplicação em humanos ou animais.
Palavra indicadora
Warning
Frases de perigo
Declarações de precaução
Classificações de perigo
Met. Corr. 1 - Skin Sens. 1
Código de classe de armazenamento
8A - Combustible corrosive hazardous materials
Certificados de análise (COA)
Busque Certificados de análise (COA) digitando o Número do Lote do produto. Os números de lote e remessa podem ser encontrados no rótulo de um produto após a palavra “Lot” ou “Batch”.
Já possui este produto?
Encontre a documentação dos produtos que você adquiriu recentemente na biblioteca de documentos.
Os clientes também visualizaram
Bone Marrow Cells Reduce Fibrogenesis and Enhance Regeneration in Fibrotic Rat Liver.
Sun CK, Chen CH, Kao YH, Yuen CM, Sheu JJ, Lee FY, Chen YT, Kung CT, Yip HK
The Journal of Surgical Research null
Oxidative stress, induced by 6-hydroxydopamine, reduces proteasome activities in PC12 cells: implications for the pathogenesis of Parkinson's disease
Elkon, H. et al.
Journal of Molecular Neuroscience, 24(3), 387-400 (2004)
Mitochondrial complex I activity and oxidative damage to mitochondrial proteins in the prefrontal cortex of patients with bipolar disorder.
Andreazza AC, Shao L, Wang JF, Young LT
Archives of General Psychiatry null
Specific inactivation of cysteine protease-type cathepsin by singlet oxygen generated from naphthalene endoperoxides.
Nagaoka, Yuki, et al.
Biochemical and biophysical research communications, 331, 215-223 (2005)
Ketone bodies stimulate chaperone-mediated autophagy.
Finn, Patrick F and Dice, J Fred
The Journal of Biological Chemistry, 280, 25864-25870 (2005)
Nossa equipe de cientistas tem experiência em todas as áreas de pesquisa, incluindo Life Sciences, ciência de materiais, síntese química, cromatografia, química analítica e muitas outras.
Entre em contato com a assistência técnica