Testy wzrostu neurytów

In Vitro Neurite Outgrowth Assays
AXIS™ Axon Isolation Devices
Linie komórek neuronalnych i podłoża hodowlane
Neuroscience Antibodies
References

Wprowadzenie

Wzrost neurytów to proces, w którym rozwijające się neurony wytwarzają nowe projekcje w odpowiedzi na wskazówki. Czynniki wzrostu nerwów lub neurotrofiny, są jedną z rodzin takich bodźców, które regulują wzrost neurytów¹. Dynamiczny wzrost neurytów podczas rozwoju prowadzi do powstania złożonej architektury neuronalnej, która skutkuje utworzeniem funkcjonalnego układu nerwowego i mózgu². Zrozumienie biologii wzrostu neurytów może rzucić światło na mechanizmy leżące u podstaw niektórych chorób neurodegeneracyjnych³. Aby zbadać wzrost neurytów, naukowcy potrzebują skutecznych metod hodowli neuronów w kulturze, stymulowania komórek związkami neurogennymi, takimi jak czynniki wzrostu, oraz monitorowania rosnących neurytów.

In Vitro Neurite Outgrowth Assays

.Testy wzrostu neurytów zostały zoptymalizowane i opracowane w celu scharakteryzowania i kwantyfikacji tworzenia, składu i zachowania neurytów w odpowiedzi na czynniki chemiczne i warunki wzrostu. Technika testowa wykorzystuje Millicell^® półporowate wkładki hodowlane (1uM, 3uM) i zoptymalizowane odczynniki do łatwej analizy wzrostu neurytów przy użyciu zwykłej detekcji kolorymetrycznej lub chemiluminescencyjnej.

Rysunek 1. Protokół testu wzrostu neurytów. Test jest prostym, wydajnym i wszechstronnym systemem do ilościowego oznaczania związków, które wpływają na tworzenie i odpychanie neurytów. Mikroporowaty filtr pozwala na biochemiczną separację i oczyszczanie neurytów i ciał komórkowych w celu szczegółowej analizy molekularnej ekspresji białek, procesów transdukcji sygnału i identyfikacji celów leków, które regulują procesy wzrostu lub cofania się neurytów. Dzięki temu systemowi możliwe jest jednoczesne badanie wielu czynników biologicznych i farmakologicznych, bezpośrednia ocena funkcji receptorów adhezyjnych i naprowadzających odpowiedzialnych za wydłużanie i odpychanie neurytów, a także analiza funkcji genów w transfekowanych komórkach.

AXIS™ Axon Isolation Devices

AXIS™ Axon Isolation Devices to montowane na suwaku urządzenia mikroprzepływowe, które analizują wzrost neurytów poprzez przestrzenne kontrolowanie dodawania czynników wzrostu, toksyn i innych odczynników. Wzrost neurytów jest ograniczony do wąskich, równoległych kanałów, a wynikowy wzrost lub zapadanie się można łatwo obserwować pod mikroskopem. Rezultatem jest potężna platforma do badania somów, neurytów lub tworzenia synaps.

Kluczowe cechy

• Organizuj, wizualizuj i charakteryzuj hodowlę komórek neuronalnych.
• Wykrywanie ekspresji białek z lepszą rozdzielczością przestrzenną.
• Oddzielanie ciał komórkowych od aksonów za pomocą płynów.
• Skrócenie czasu i kosztów dzięki zoptymalizowanym protokołom i zatwierdzonym produktom QC.
• Najwyższa wydajność w porównaniu z protokołami wewnętrznymi.
• Optycznie przezroczysta, obojętna, nietoksyczna i niepalna forma polimerowa.
• Dostępne w rozmiarach 150 μm, 450 μm, 900 μm lub 6-dołkowe.

Ilustracja wiązanego plazmowo urządzenia AXIS^® Device

AX50005PB

Rysunek 2. Ilustracja urządzenia AXIS&trade z wiązaniem plazmowym

Wpływ trzech neurotoksyn na wzrost aksonów wizualizowany za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej

Rysunek 3. Analiza neurotoksyczności przy użyciu urządzeń do izolacji aksonów AXIS™. Aksony poddano działaniu 300 μM MPP+, 5 mM akryloamidu i 500 nM rotenonu, począwszy od 4. dnia po umieszczeniu na planszy, poddając je działaniu toksyn przez 3 dni. Górny rząd pokazuje przedłużenia aksonów, które zostały wystawione na działanie toksyny, podczas gdy dolny rząd pokazuje odpowiednie aksony kontrolne. Przerywana żółta linia wskazuje koniec mikrorowków.

Linie komórek nerwowych i pożywki

Neurony pierwotne

Podłoże do hodowli neuronów

Immortalizowane linie komórek nerwowych

Czynniki neurotroficzne

Linie neuronalnych komórek macierzystych i media

Małe cząsteczki bioaktywne

Neuroscience Antibodies

Zrozumienie wzrostu neurytów może poprawić terapię zaburzeń rozwojowych układu nerwowego i chorób neurodegeneracyjnych. Nasze szeroko zwalidowane przeciwciała do badania wzrostu neurytów mogą pomóc w określeniu mechanizmów wzrostu aksonów.

Wspólne markery neuronowe

NeuN

b-Tubulina

MAP2

Nestyna

Synaptofizyna

.

 

Pan-Neuronal

Doublecortin

vGlut

Hydroksylaza tyrozyny

Zobacz ponad 80 000 przeciwciał

Rysunek 4. Neuron

Referencje

1. Davies AM. 2000. Neurotrophins: Neurotrophic modulation of neurite growth. Current Biology. 10(5):R198-R200. https://doi.org/10.1016/s0960-9822(00)00351-1

2. Tosney KW, Landmesser LT. 1985. Development of the major pathways for neurite outgrowth in the chick hindlimb. Developmental Biology. 109(1):193-214. https://doi.org/10.1016/0012-1606(85)90360-4

3. Millecamps S, Julien J. 2013. Axonal transport deficits and neurodegenerative diseases. Nat Rev Neurosci. 14(3):161-176. https://doi.org/10.1038/nrn3380