Przejdź do zawartości
Merck

Bufory HPLC

Sterta kryształów soli buforowej

Bufory to roztwory słabego kwasu i jego sprzężonej zasady lub słabej zasady i jej sprzężonego kwasu. W chemii analitycznej bufory są zwykle stosowane w wysokosprawnej chromatografii cieczowej z odwróconymi fazami (RP-HPLC), gdy próbka zawiera kwaśne lub zasadowe grupy funkcyjne. Bufory łagodzą wpływ jonów wodorowych/hydronowych i wodorotlenkowych, zmniejszając wahania pH.  



Powiązane zasoby


Bufory fazy ruchomej

Właściwy wybór buforu, pod względem gatunków buforujących, siły jonowej i pH, jest najbardziej krytycznym etapem opracowywania metody RP-HPLC dla analitów jonowych. Na retencję analitów jonowych w RP-HPLC zasadniczy wpływ ma pH fazy ruchomej. W związku z tym kontrola pH fazy ruchomej w RP-HPLC jest jednym z najważniejszych parametrów skutecznej separacji analitów.

Typowy zakres pH dla separacji w fazie odwróconej na kolumnach krzemionkowych wynosi od 2 do 8. Bufor musi mieć pKa zbliżone do pożądanego pH, ponieważ bufory najlepiej kontrolują pH przy swoim pKa. Zasadniczo idealnie jest wybrać bufor o wartości pKa <2 jednostki pożądanego pH fazy ruchomej. Oferujemy bufory klasy HPLC dla szerokiego zakresu pH dla wszystkich wymagań chromatografii laboratoryjnej.

Factors to be considered while choosing a HPLC Buffer

Chemical Purity.

Jakość dodatków do fazy ruchomej (bufory, sole, kwasy i zasady) wraz z rozpuszczalnikami organicznymi wykorzystywanymi w eksperymencie HPLC musi być dostosowana do czułości detektora i protokołu elucji. Wysokiej jakości rozpuszczalniki i odczynniki są zalecane do optymalnej chromatografii.

Kompatybilność chemiczna

Skład buforu wraz z pH fazy ruchomej musi być dobrany w porozumieniu z materiałem obudowy kolumny i charakterem fazy stacjonarnej. Zapobiega to uszkodzeniu sprzętu i złoża kolumny.

Rozpuszczalność buforu

Zasadniczo bufor powinien być całkowicie rozpuszczalny w wodzie i nie powinien się wytrącać. Stężenie buforu musi być starannie dobrane, aby uniknąć wytrącania przy wyższych stężeniach, gdy bufor jest mieszany z rozpuszczalnikiem organicznym. Jeśli zostanie to zaniedbane, może to spowodować problemy operacyjne w pompach i blokadę kolumny HPLC.

Siła buforu

Eluent wykazujący słabe oddziaływanie z fazą stacjonarną jest zdolny do elucji tylko słabo związanych analitów z kolumny, podczas gdy silne oddziaływanie powoduje elucję silnie związanych cząsteczek próbki. Siła elucji lub rozpuszczania różnych rozpuszczalników zależy od rodzaju zastosowanej fazy stacjonarnej. Po sile elucji, lepkość i absorbancja UV buforu odgrywa ważną rolę pod względem ich przydatności do stosowania w analizach HPLC. 



Zaloguj się, aby kontynuować

Zaloguj się lub utwórz konto, aby kontynuować.

Nie masz konta użytkownika?