Przygotowanie próbki przez filtrację
Filtracja to technika separacji stosowana do zagęszczania lub oczyszczania substancji w oparciu o ich właściwości fizyczne lub chemiczne. Jest to prosta i rutynowa metoda stosowana w wielu laboratoriach do usuwania nierozpuszczalnych cząstek z roztworów i przygotowywania próbek do analizy. Filtracja jest stosowana w celu zmniejszenia złożoności próbki, poprawy przejrzystości lepkich próbek i zmniejszenia sygnałów tła, co skutkuje zwiększeniem stosunku sygnału do szumu w testach analitycznych.
W zależności od zastosowanej metody filtracji, cząsteczki lub molekuły są oddzielane na podstawie właściwości takich jak rozmiar, kształt lub ładunek. Ciecz, która przechodzi przez filtr nazywana jest "filtratem", a zebrany lub zatrzymany materiał to "retentat" lub "pozostałość".
- Odwrócona osmoza (separacja jonowa) oddziela jony lub cząsteczki za pomocą półprzepuszczalnej membrany lub bariery. Zastosowane ciśnienie pokonuje ciśnienie osmotyczne i zmusza rozpuszczalnik do przemieszczania się z wysokiego stężenia substancji rozpuszczonej do niskiego stężenia substancji rozpuszczonej. Odwrócona osmoza odrzuca wysoki procent materii organicznej innej niż cząstki stałe i 99% soli. Typowa ocena membrany opiera się na retencji chlorku sodu (<0,001 µm, <100 Daltonów)
- Ultrafiltracja (separacja makrocząsteczek) oddziela cząsteczki i rozpuszczone cząsteczki z płynów na podstawie wielkości cząsteczek. Ultrafiltracja jest stosowana do zatężania, frakcjonowania, odsalania i wymiany buforów. Typową wartością jest nominalny limit masy cząsteczkowej (NMWL) pomiędzy 1-1000 kDa.
- Filtracja mikroporowata (mikrofiltracja) jest stosowana do zatrzymywania/wykluczania cząstek i sterylizacji, ponieważ oddziela/usuwa cząstki i jednostki biologiczne, takie jak bakterie i komórki, na podstawie wielkości cząstek. Rozmiary porów wynoszą zazwyczaj od 0,025 do 10 µm i są oceniane jako nominalne (~98% retencji) lub absolutne (100% retencji wielkości równej wielkości porów).
- Filtry klarujące są używane do filtracji wstępnej i analizy cząstek, ponieważ zatrzymują/usuwają duże cząstki, agregaty i zanieczyszczenia w oparciu o rozmiar. Mogą być stosowane jako podstawowy etap filtracji przed mikrofiltracją. Filtry klarujące mają zazwyczaj wielkość porów wynoszącą 5 µm. zatrzymywane.
Powiązane artykuły techniczne
- Syringe filter selection guide for HPLC, UHPLC, and Ion Chromatography using pore size, filter diameter, chemical compatibility, analyte binding, and extractables.
- Metody filtracji i wybór filtrów membranowych w oczyszczaniu i produkcji nanocząstek.
- Filtration is used in dissolution testing to end the dissolution process and prepare the sample for HPLC analysis. This page discusses the importance of filtration and utility of hydrophilic PTFE Millex® syringe filters in dissolution testing.
- Ultrafiltration using Amicon® Ultra centrifugal devices for concentrating virus in preparation of high titer virus stocks and isolation of virus from samples.
- Syringe membrane filter selection and validation methods to assess analyte loss due to membrane filter adsorption in pharmaceutical quality control (QC) testing.
- Zobacz wszystkie (27)
Powiązane protokoły
- Do analizy kofeiny w kawie wykorzystano HPTLC. Jedynym sposobem przygotowania próbki była filtracja kawy przez filtr strzykawkowy PTFE. Kwantyfikacja została przeprowadzona za pomocą skanera TLC.
- Protokoły oczyszczania immunoglobulin zasadniczo obejmują wiązanie powinowactwa do podłoża chromatograficznego z białkiem A lub G, przemywanie niezwiązanych białek i elucję buforem o niskim pH.
- HPLC Analysis of Polyphenols in Nero d'Avola Red Wine on Discovery® HS C18 (UV 280 nm)
- Millicup™-FLEX disposable vacuum filter was designed to reduce contamination and save time. The solvent-resistant unit allows for filtration into storage bottles.
- Review resources about adding the Samplicity® filtration system to your HPLC workflow. Watch our step-by-step video to understand how the Samplicity® G2 filtration system works and use our application notes to learn more about how the Samplicity® G2 filtration system has been applied for HPLC sample preparation.
- Zobacz wszystkie (16)
Znajdź więcej artykułów i protokołów
Commonous Filtration Applications
- Ogólne usuwanie cząstek stałych
- Przygotowanie próbek do technik analitycznych, takich jak HPLC, UHPLC, chromatografia jonowa, chromatografia gazowa i testy rozpuszczania
- Sterylizacja dodatków do hodowli komórkowych
- Stężenie białek, kwasów nukleinowych i polimerów
- Rozdzielanie biomolekuł w próbce
- Przygotowanie buforów<
- Oczyszczanie wody
Filtracja jest niezbędnym etapem przygotowania próbki przed wrażliwą analizą chromatograficzną, taką jak HPLC i LC-MS. Cząstki stałe w próbkach mogą zakłócać analizy chromatografii cieczowej, gazowej i jonowej poprzez zatykanie kolumn lub głowic kolumn, lub poprzez generowanie pików zanieczyszczeń ("pików duchów") na chromatogramach. Właściwa filtracja próbek, rozpuszczalników i buforów zapewnia wyższą jakość i spójność wyników analitycznych.
Types of Filtration Processes & Procedures
Istnieje wiele filtrów o różnym składzie mediów filtracyjnych, z których każdy jest przeznaczony do określonych zastosowań. Wybór filtra zależy od kilku czynników, w tym
- Rozmiar cząstek lub molekuł, które mają być wykluczone lub włączone
- Skład chemiczny próbki
- Kompatybilność mediów filtracyjnych z próbką lub roztworem
- lepkość próbki
Filtry mogą być wykonane z różnych rodzajów materiałów, takich jak papier, tkanina, wełna bawełniana, azbest, żużel lub wełna szklana, nieszkliwione wyroby ceramiczne, piasek lub inny porowaty materiał. Filtry membranowe są zwykle wykonane z syntetycznych polimerów (np. hydrofilizowanego PTFE, PVDF, nylonu, PES).
Do napędzania procesu filtracji można zastosować różne siły. Filtracja może być napędzana zwykłą grawitacją przy użyciu filtra i lejka, ręcznie, jak w przypadku filtracji strzykawkowej, lub siłą odśrodkową. W przypadku filtracji próżniowej, pompa próżniowa jest używana do szybkiego przeciągania płynu przez filtr.
Zaloguj się lub utwórz konto, aby kontynuować.
Nie masz konta użytkownika?